哺乳动物卵泡发育受多种激素的调节。INH（卵泡抑制素）由卵巢大卵泡颗粒细胞产生,对大卵泡发育有抑制作用。Gn IH（促性腺激素释放抑制激素）是下丘脑分泌的多肽,通过调节FSH（促卵泡素）分泌而抑制大卵泡发育。AMH（抗缪勒管激素）主要由腔前卵泡和小腔卵泡颗粒细胞分泌,对小卵泡的发育有抑制作用。本实验室前期研究证明,用INH真核表达质粒和INH-GnIH共表达质粒免疫小鼠、大鼠、鸡、羊和牛,均可促进卵泡发育并提高排卵率,而且共表达质粒比单表达质粒的效果好。但是,由于卵泡发育还受AMH的抑制,根据生理代偿原理,在两条“抑制”途径被阻断后,另一条抑制途径的抑制效果可能增强。而Campbell等（2012）在绵羊的研究中发现,应用AMH合成肽片段免疫9只绵羊,可以使大卵泡数和排卵数增加,提示通过免疫或基因免疫有望开发提高动物繁殖力的新技术。本研究基于AMH对原始卵泡发育的“抑制”作用原理,应用基因免疫技术中和内源性AMH,解除AMH对原始卵泡的抑制作用,旨在开发促卵泡发育的新技术和新药物。主要研究内容及结果如下:AMH蛋白B细胞抗原表位预测。运用DNAStar分析软件、Antherprot分析软件和EX-PASY服务器等工具预测AMH蛋白抗原表位,结合蛋白质二级结构,亲水性、抗原性、表面可能性和柔韧性指数,综合分析AMH蛋白潜在的抗原决定簇,共筛选出四个区域,分别位于AMH的20～50、144～171、287～310和450～476位氨基酸残基区域,提示作为抗原表位的可能性最大。融合乙肝表面抗原的非抗性筛选AMH基因疫苗构建及鉴定。根据4个区域氨基酸序列在NCBI上找出对应的碱基序列,合成4个tPA-SAMH片段,将其载入含有平衡致死系统的pVAX-asd载体中,得到4个非抗性筛选的AMH质粒,即p20、p144、p287和p450。经双酶切及测序鉴定,质粒构建成功。将质粒p20、p144、p287和p450分别转染C2C12细胞,经RT-PCR扩增技术检测,发现4个质粒均可在真核细胞中表达,但表达量最高的是质粒p144和p20,最低的是质粒p287。并以猪减毒沙门氏菌为疫苗的载体菌,分别转化上述4个质粒,获得4个工程菌,经双酶切及测序鉴定电转后质粒碱基无突变,PCR检测菌株特性,均鉴定正确。四种工程菌免疫小鼠的效果。取160只5周龄的昆明雌鼠,随机分为5组,实验组分别免疫4个疫苗（分别为T1、T2、T3和T4组）,对照组注射100 u L生理盐水。间隔2周加免一次,共加免2次,然后配种。间隔2周尾尖采血,检测血液中抗AMH抗体滴度以及孕酮和雌二醇激素水平,统计产仔数。结果表明4个实验组均能诱导小鼠发生免疫反应,其中T1组（P20）无论是在抗AMH抗体滴度、产仔数、次级卵泡数等显著高于对照组和其他实验组（P＜0.05）,免疫效果最好。非抗性筛选的基因工程菌安全性评估。实验结束时采集各实验组鼠的大脑、心、肝、脾、肺、肾、卵巢、小肠和注射部位肌肉,制作病理切片均未发现组织发生病变,PCR扩增技术检测均未发现疫苗DNA整合到小鼠组织基因组DNA中,实验组与对照组小鼠的大脑、心、肝、脾、肺、肾等的脏器指数均无显著差异（P＞0.05）,表明4个非抗性筛选基因工程菌具有良好的生物安全性。