目的:克隆2个截短型人转化生长因子βII型受体(t TβRII-6,t TβRII-G)基因片段,构建原核表达载体p ET-21a-t TβRII-6、p ET-21a-t TβRII-G。优化蛋白表达条件,并对其进行生物活性分析,为下一步中试制备奠定基础。方法:提取人血液中RNA,逆转录转化为c DNA,常规PCR扩增出带有t TβRII-G、t TβRII-6目的基因,并插入原核表达载体p ET-21a中,重组质粒命名为p ET-21a-t TβRII-G、p ET-21a-t TβRII-6。经过PCR扩增、双酶切和DNA测序鉴定后,构建好的p ET-21a-t TβRII-G、p ET-21a-t TβRII-6转化至大肠杆菌Rossta中诱导表达,然后镍柱层析纯化获得高纯度的目的蛋白t TβRII-G、t TβRII-6。经SDS-PAGE进行纯度分析,MTT比色法观察其对TGF-β1活化的人肝星状细胞LX-2增殖活性的影响,同时q RT-PCR检测其对FN m RNA、α-SMA m RNA、Col-4a1 m RNA相关基因的影响。结果:成功扩增t TβRII-G(393 bp)、t TβRII-6(432 bp)基因片段,经PCR、双酶切和DNA测序鉴定后插入到原核表达载体序列正确。表明p ET-21a-t TβRII-G、p ET-21a-t TβRII-6原核表达载体成功构建。摸索出最佳的诱导时间、诱导剂浓度和诱导温度,并纯化目的蛋白,经SDS-PAGE进行纯度分析,在20℃,180 rpm诱导20小时的t TβRII-G(18 k Da)、t TβRII-6(20 k Da)蛋白表达效果最佳。经过镍柱层析获得高纯度的t TβRII-G、t TβRII-6蛋白。MTT比色法表明t TβRII-G、t TβRII-6蛋白能抑制10 ng/ml TGF-β1活化的人肝星状细胞LX-2增殖活性。q RT-PCR检测发现150μg/m L的t TβRII-G、t TβRII-6蛋白能显著抑制FN m RNA、α-SMA m RNA、Col-4a1m RNA相关基因的表达。结论:成功构建了pET-21a-t TβRII-G、pET21a-t TβRII-6原核表达载体,诱导表达并纯化获得高纯度目的蛋白。t TβRII-G和t TβRII-6蛋白能抑制TGF-β1活化的LX-2细胞增殖并能降低纤维化相关基因的表达。