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虫生真菌以其寄主广泛,不易产生抗性,生产工艺简单,对环境友好等优点成为国内外生物防治研究的热点。我国虫生真菌资源丰富,但是能够防治叶螨的病原真菌报道较少。本实验室从田间采集的柑橘全爪螨Panonychus citri(McGregor)螨尸上分离到2株病原真菌,分别鉴定为交枝顶孢霉Sarocladium implicatum CQBBW8(简称CQBBW8)与枝状枝孢霉C ladosporium cladosporioides CQBBW3(简称CQBBW3)。为加强对这2个菌株的了解,为生物杀螨真菌制剂的开发奠定理论基础,本文对这2个菌株进行了杀螨活性、生物学特性、杀虫机理以及遗传转化等方面的研究,结果如下:CQBBW8菌株杀柑橘全爪螨活性较好,LC50值为1.2×106个孢子/mL,LT50值为5.1759 d,好于CQBBW3菌株的LC50值4.66×108个孢子/mL和LT50值6.2353d。生物学特性研究发现,CQBBW8菌株在PDA培养基上菌丝生长最快,在SEA培养基上产孢量最大;而CQBBW3菌株在淀粉琼脂培养基上菌丝生长最快,在查氏培养基上产孢最大。2个菌株均在以甘露醇为碳源、蛋白胨为氮源的培养基上菌丝生长最快,最适生长及孢子萌发温度为25℃,CQBBW8菌株的最适产孢温度为30℃,而CQBBW3菌株的最适产孢的温度为15℃;2个株菌均在pH为6.0~8.0范围内生长和产孢较好,分生孢子在强酸性环境下萌发率更高;紫外线对2个菌株的生长和产孢有一定的影响,对孢子有很强的杀伤作用。此外,2个菌株与杀菌剂氧化亚铜和5种杀螨剂的相容性均较好,在田间可以互配使用。采用“浸渍法”分别测定了CQBBW8与CQBBW3菌株对家蚕4龄幼虫及蚕蛹的致病力,并采用福林酚试剂法和几丁质酶活试剂盒测定了2个菌株在蝉蜕培养基中胞外蛋白酶与几丁质酶的表达情况。结果显示,CQBBW8与CQBBW3菌株对家蚕幼虫的校正死亡率、LT50值以及对蚕蛹的LC50值分别为80.00%、4.3439d、9.4817×108个孢子/mL与69.99%、5.5697 d、1.26×1010个孢子/mL,CQBBW8菌株的杀虫效果更好。从CQBBW8与CQBBW3菌株在蝉蜕诱导培养基中产胞外蛋白酶和几丁质酶的变化趋势表明,蛋白酶和几丁质酶均增强表达,在降解蝉蜕的过程中二者作用顺序相同,但蛋白酶起主要作用。比较分析这2个菌株蛋白酶与几丁质酶活性的变化趋势,发现CQBBW8比CQBBW3菌株分解体壁蛋白质和几丁质的能力更强。柑橘全爪螨被CQBBW8与CQBBW3菌株分别侵染后,螨体内的3种解毒酶活性发生了不同程度的变化,响应顺序均为:谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)、羧酸酯酶(CarE)、乙酰胆碱酯酶(AchE)。三种酶活均呈先上升后下降的趋势,GSTs活性从第1 d就快速上升,CQBBW8与CQBBW3菌株侵染引起的最大酶活分别出现在第3、4 d,为8.13、6.53 U/mL prot;CarE活性从第2 d开始快速上升,2个菌株的侵染引起的酶活高峰也分别出现在第3、4 d,分别为12.98、10.06 U/mL prot;AchE活性从第3天开始快速上升,且均在第4 d酶活性最大分别为0.1818、0.1120 U/mL prot;3种解毒酶活均在4~5 d开始快速下降,在第6、7 d接近或低于对照,说明螨体接近死亡。利用根癌农杆菌介导转化(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)构建CQBBW8菌株的T-DNA随机插入突变体库,分析表型突变菌株相关基因的功能。结果显示,遗传转化体系的转化效率为100~200个转化子/106个孢子,从构建的含有2800个转化子的突变体库中筛选出41株表型变化较大的转化子。采用Hi-TAIL PCR技术扩增到9株突变子的T-DNA插入位点侧翼序列,将获得侧翼序列与CQBBW8菌株的基因组数据进行比对分析,得到相应基因为:寡肽转运蛋白(OPT)(B11转化子)、RNA聚合酶II转录因子(B36转化子)、延胡索酰乙酰乙酸(FAA)水解酶(B54转化子)、P450(W27、W55转化子)以及功能未知基因(B77转化子)等,其相关功能有待进一步验证。