【摘 要】
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目的建立表柔比星诱导的人乳腺癌多药耐药细胞亚系MDA-MB-231/EPI,并初步探讨其多药耐药机制。方法1.通过逐步增加表柔比星浓度,长期间歇性刺激的方法诱导MDA-MB-231细胞获得
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目的建立表柔比星诱导的人乳腺癌多药耐药细胞亚系MDA-MB-231/EPI,并初步探讨其多药耐药机制。方法1.通过逐步增加表柔比星浓度,长期间歇性刺激的方法诱导MDA-MB-231细胞获得耐药特性。2.MTT法检测细胞对药物的敏感性及生长曲线。3.HE染色观察细胞形态学变化。4.透射电子显微镜(TEM)观察细胞的自噬体及超微结构的变化。5.流式细胞术检测细胞周期的分布,耐药蛋白P-gp的表达及阿霉素、罗丹明的蓄积和排出。6.QRT-PCR检测基因Mrp 1及bcl-2 mRNA的表达。7.Western blot检测自噬相关蛋白LC3的表达。结果1.历经12个月、8个浓度梯度,获得一株乳腺癌多药耐药细胞株,命名为MDA-MB-231/EPI。2.耐药MDA-MB-231/EPI细胞的核/浆比例增大、生长速度减慢、G0/G1期细胞比例增加,耐药MDA-MB-231/EPI细胞耐表柔比星的指数为26.27倍、耐紫杉醇的指数为12.261倍、耐依托泊苷的指数为1.739倍、耐顺铂的指数为3.834倍。3.耐药MDA-MB-231/EPI细胞中耐药基因Mrpl mRNA水平增加53倍(P<0.01),耐药蛋白P-gp表达增高90倍(P<0.01),ADM、Rh123在细胞内的蓄积和外排能力都增强,4.耐药MDA-MB-231/EPI细胞的自噬体明显多于亲本MDA-MB-231细胞,而且LC3的转化维持在高水平,显著高于亲本细胞。使用自噬抑制剂氯喹后,自噬体消失,耐药MDA-MB-231/EPI细胞对表柔比星的敏感性增强(P<0.05)。5.与亲本MDA-MB-231细胞相比,表柔比星诱导的耐药MDA-MB-231/EPI细胞中凋亡的负向调节因子bcl-2的mRNA水平增加了 2.956倍(P<0.05),使用氯喹处理后,耐药MDA-MB-231/EPI细胞中bcl-2的mRNA水平下降为1.753倍(P＜0.05)。结论1.成功建立人乳腺癌表柔比星耐药细胞株MDA-MB-231/EPI。2.耐药MDA-MB-231/EP细胞的生物学特性表现得更加幼稚,具有多药耐药性。3.耐药MDA-MB-231/EPI细胞高表达Mrp1和P-gp及其主动药物外排活性是其耐药的部分机制。4.耐药MDA-MB-231/EPI细胞中,自噬可能通过抑制药物诱导的凋亡来保护细胞。
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