论文部分内容阅读
目的：观察硫化氢供体硫氢化钠及P38MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580对肝纤维化大鼠肝组织形态学及胶原沉积的影响，探讨硫化氢与P38MAPK信号通路的关系，进一步了解硫化氢对肝纤维化作用的分子机制。方法：采用40%四氯化碳棉籽油背部皮下注射联合高脂肪高胆固醇饲料及酒精的复合因素法建立肝纤维化大鼠模型。肝纤维化模型大鼠于建模成功后分为5组：肝纤维化组(HF组)、DMSO溶剂对照组(D组)、硫氢化钠组(S组)、SB203580组(SB组)、SB203580+硫氢化钠组(SB+S组)，分别腹腔注射生理盐水、2‰DMSO溶液、SB203580溶液(0.3mg/kg·d)、硫氢化钠溶液(56μmol/kg·d)、SB203580溶液+硫氢化钠溶液(0.3mg/kg·d、56μmol/kg·d)进行干预，共4次。各组大鼠均于干预结束后次日处死并留取肝脏。经HE染色观察肝组织纤维化分期，Masson染色计算用于评估肝组织内胶原沉积的SSS评分，免疫组织化学染色观察肝组织I、III型胶原蛋白的表达，RT-PCR法检测肝组织内I、III型胶原mRNA表达水平，Western blot法检测肝组织内P38MAPK、Caspase-3蛋白表达水平。结果：(1)HE染色见肝纤维模型组肝脏内小叶结构紊乱，纤维结缔组织增生、假小叶形成，肝细胞变性坏死及炎细胞浸润明显。(2) HE染色观察肝纤维化分期，HF组、D组肝纤维分期较N组显著升高，S组、SB组、SB+S组肝纤维化分期分别较HF组、D组下降，SB组、S组间无明显差异，SB+S组肝纤维化分期较SB组、S组下降。(3) Masson评价肝组织SSS评分，HF组、D组SSS评分较N组显著升高，S组、SB组、SB+S组SSS评分分别较HF组、D组降低，SB+S组SSS评分比S组、SB组低，S组SSS评分较SB组无差异。(4)免疫组织化学染色及RT-PCR法检测肝组织I、III型胶原蛋白及其mRNA的表达， HF组、D组I、III型胶原蛋白及其mRNA表达较N组显著增加，S组、SB组、SB+S组I、III型胶原蛋白及其mRNA分别较HF组、D组减少，SB+S组I、III型胶原蛋白及其mRNA表达比S组、SB组少，但S组I、III型胶原蛋白及其mRNA较SB组无差异。(5)Western-blot结果示： N组、HF组、D组、S组的P38MAPK蛋白表达无差异，SB组P38MAPK蛋白的表达较HF组减少，SB+S组P38MAPK蛋白表达较SB组增多；HF组caspase-3蛋白表达较N组、S组、SB组和SB+S组增多，SB+S组caspase-3蛋白表达较S组、SB组减少，但S组表达较SB组减少更明显。结论：(1)四氯化碳复合因素法可成功建立肝纤维化动物模型；(2) P38MAPK信号通路与肝纤维化的发生发展紧密相关，P38MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580可显著改善肝纤维化；(3)硫化氢对肝纤维化的保护作用与P38MAPK信号通路相关。