目的:本实验通过比较野生型的乳腺癌细胞(MDA-MB-231)和CD82过表达的乳腺癌细胞(CD82-231)在微流控芯片上的精细、实时的侵袭动力学信息和两种细胞Wnt/β-catenin通路中的蛋白和基因表达情况来研究CD82对于乳腺癌细胞侵袭的影响。方法:本实验属于方法学和传统生物学相结合的研究,通过慢病毒转染技术将野生型的MDA-MBA-231细胞稳定过表达CD82,建立CD82过表达细胞株。我们设计了一种可用于监测乳腺癌细胞侵袭动力学的微流控芯片,能够近似模拟人体乳腺细胞外基质微环境,在芯片中记录细胞侵袭全过程,包括细胞运动形态,细胞侵袭面积等信息,综合评价MDA-MB-231与CD82-231的生物学行为。进而通过免疫荧光技术,实时荧光定量PCR技术和免疫印迹实验研究CD82如何通过调控Wnt/β-catenin通路影响乳腺癌细胞侵袭。结果:1.CD82的转染效率为95.34%。2.随着芯片培养时间加长,两种细胞在芯片中的侵袭面积都不断增加,但相同条件下,CD82-231细胞的侵袭速度总是小于MDA-MB-231细胞。并且胶原浓度越大,细胞侵袭速度越慢。可以看出,细胞更倾向于以细胞团的形式向前侵袭,通过观察不同时间点细胞团所处位置,可以判断出CD82-231细胞的侵袭速度更慢一些。3.细胞在芯片三维环境中的侵袭形态可以分为四种:?向前伸出一个触角进行侵袭;?向后伸出一个触角进行侵袭;?向前和向后各伸出一个触角侵袭;?向四周伸出多个触角进行侵袭。并且三维环境中的细胞长/宽比例明显大于二维环境中的细胞。4.CD82通过使Wnt/β-catenin信号通路中的Fzd-2减少和E-Cadherin增多,从而导致β-catenin蛋白由细胞核转移到细胞质和细胞膜,阻止了下游基因(C-myc、Survivin、Cyclin-D和F1)的转录,进而抑制了细胞的侵袭和转移。如果CD82和KYA1797K共同作用,乳腺癌细胞的侵袭过程会得到明显的抑制。结论:本实验设计了一种可用于监测乳腺癌细胞侵袭动力学的微流控芯片,证明CD82抑制乳腺癌细胞侵袭。其机制是使Wnt/β-catenin信号通路中的E-Cadherin增加和Fzd-2减少,使大量β-catenin停留在细胞质和细胞膜,无法进入细胞核开启下游靶基因的转录,从而抑制了乳腺癌细胞在微流控芯片中的侵袭。如果CD82与KYA1797K共同作用会有更好的抑制效果。