小口径细菌纤维素人工血管制备及性能研究

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目的:自制细菌纤维素(Bacterial cellulose,BC)平面膜,经过脱水处理并测定其性能。同时利用模具制备BC血管并脱水处理,采用该BC血管构建家兔颈动脉移植模型,初步探讨BC血管通畅率。而后在BC血管表面接枝内皮细胞特异性黏附分子REDV多肽,使用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)进行细胞黏附实验,制备内皮化BC血管,提高BC血管的血液相容性。方法:通过Hestrin&Schramm(HS)培养基培养木葡糖醋杆菌,制备BC平面膜,通过低温析出法对BC材料进行脱水处理,采用扫描电子显微镜(SEM)观察BC表面纳米纤维结构,万能拉力试验机测试BC材料力学性能,差示扫描热量仪(DSC)实验验证脱水BC热力学性能。在无菌操作台下,将菌液灌注至2 mm医用硅橡胶管道中,采用渗氧单管法制备小口径BC人工血管。采用血管套管法对家兔颈动脉行BC血管置换手术,构建兔颈动脉移植模型,初步评价BC血管进行血管置换的可行性及通畅性。进一步地,采用2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物自由基(TEMPO)将BC羧基化,并通过碳化二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)化学法将BC表面羧基进行活化以固定内皮细胞特异性黏附分子REDV多肽。通过荧光染色法考察体外HUVECs在改性前后BC材料表面的黏附情况。结果:成功通过HS培养基培养木葡糖醋杆菌,形成菌液后灌注至医用硅橡胶管,经渗氧单管法制备了直径低至2 mm的小口径BC血管。经低温析出法处理的BC材料可以脱除95%水分,通过SEM观察发现脱水后的BC较脱水前纳米结构更加清晰,力学实验结果表明脱水后的BC材料的断裂拉伸应力较脱水前显著提高。经血管套管吻合法将BC血管移植到兔子颈动脉,术中观察到血流可从人工血管中流通,家兔清醒后存活良好,表明颈动脉移植模型构建成功。术后1月处死家兔并取出BC血管发现其外观无明显变化,管壁完整但管腔仍然出现不同程度钙化。经过REDV多肽改性后的BC表面HUVECs黏附数量较未改性BC表面明显增多,细胞生长良好。结论:通过培养木葡糖醋杆菌,采用渗氧单管法可制备管径可控的BC小口径人工血管。采用血管套管法成功构建了家兔颈动脉置换模型。经TEMPO及EDC/NHS方法可以将REDV多肽固定到BC表面,与未经处理的BC材料比,含REDV的BC材料表面可以增强内皮细胞黏附。改性后BC血管的抗血栓能力及远期通畅率仍需进一步研究。
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