【摘 要】
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目的探讨提前介入骨边刺结合电针对骨癌痛-吗啡耐受大鼠的作用,以及PI3K/Akt/JNK1/2信号通路在其中的作用机制。方法第一部分选35只健康雌性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、骨癌痛组（BCP组）、吗啡耐受组（BCP+MT组）、骨边刺结合电针组（BCP+MT+EA-BN组）和假骨边刺组（BCP+MT+ShamEA组）。除Sham组于左胫骨髓腔内注入无菌PBS液外,其余组相同位置均接种等
【基金项目】
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浙江省自然科学基金（Y16H270062）；
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目的探讨提前介入骨边刺结合电针对骨癌痛-吗啡耐受大鼠的作用,以及PI3K/Akt/JNK1/2信号通路在其中的作用机制。方法第一部分选35只健康雌性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、骨癌痛组（BCP组）、吗啡耐受组（BCP+MT组）、骨边刺结合电针组（BCP+MT+EA-BN组）和假骨边刺组（BCP+MT+ShamEA组）。除Sham组于左胫骨髓腔内注入无菌PBS液外,其余组相同位置均接种等量MRMT-1乳腺癌细胞诱导骨癌痛模型,诱导成功后BCP+MT组、BCP+MT+EA-BN组、BCP+MT+ShamEA组均腹腔注射盐酸吗啡注射液（q12h）,连续注射11d制备骨癌痛-吗啡耐受模型。癌细胞接种后第15d,BCP+MT+EA-BN组于上午吗啡腹腔注射后予骨边刺结合电针治疗,BCP+MT+ShamEA组行假电针治疗,取双侧“足三里”、“昆仑”穴,每日1次,30min/次,连续7d。分别检测癌细胞接种前1d,术后第10d、11d、15d、21d干预后的大鼠左侧机械缩足阈值（PWT）。采用Western blot检测各组大鼠脊髓背角（SCDH）中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）,磷酸化c-Jun NH2-末端激酶1/2（p-JNK1/2）以及β-arrestin2蛋白质表达情况。第二部分选48只健康SD雌性大鼠,随机分为吗啡耐受组（BCP+MT+DMSO组）、PI3K抑制剂组（BCP+MT+LY294002组）、骨边刺结合电针组（BCP+MT+EA-BN+PBS 组）、PI3K 激动剂组（BCP+MT+EA-BN+IGF-1 组）。4组均诱导骨癌痛-吗啡耐受模型（同第一部分）。癌细胞接种后第15d,BCP+MT+EA-BN+PBS组与BCP+MT+EA-BN+IGF-1组,上午吗啡注射后开始进行骨边刺结合电针干预,时间参数同第一部分。于癌细胞接种后第17d、19d、21d,吗啡注射前30min,四组大鼠分别鞘内注射等量PI3K抑制剂（LY294002）、抑制剂溶剂（DMSO）、PI3K激动剂（IGF-1）以及激动剂溶剂（PBS）,其余干预不变。分别检测癌细胞接种前8d、1d,术后第10d、11d、15d、17d、19d、21d干预后的大鼠左侧PWT。采用Western blot检测各组大鼠SCDH中p-Akt、p-JNK1/2、以及β-arrestin2蛋白质表达情况。结果第一部分癌细胞接种前1d,5组大鼠PWT均无差异（P>0.05）。癌细胞接种后第10d,其余四组大鼠PWT均明显低于Sham组（P<0.01）。癌细胞接种后21d,与BCP组相比,BCP+MT组、BCP+MT+ShamEA组大鼠PWT差异均无统计学意义（均P>0.05）。BCP+MT+EA-BN组大鼠PWT均高于BCP+MT组和BCP+MT+ShamEA 组（P<0.01）。与 Sham 组相比,BCP 组、BCP+MT 组大鼠SCDH 中的 p-PI3K、p-Akt、p-JNK1/2、β-arrestin2 蛋白相对表达均升高（P<0.05,P<0.01）。BCP+MT+EA-BN 组大鼠 SCDH 中的 p-PI3K、p-Akt、p-JNK1/2、β-arrestin2蛋白相对表达均低于BCP+MT组和BCP+MT+ShamEA组（P<0.05,P<0.01）。第二部分癌细胞接种前1d,4组大鼠PWT无差异（P>0.05）。癌细胞接种后第10d,4组大鼠PWT均降低（P<0.01）。癌细胞接种后21d,与癌细胞接种后 10d相比,BCP+MT+LY294002组与BCP+MT+EA-BN+PBS组大鼠PWT均升高（P<0.05,P<0.01）,且BCP+MT+LY294002 组高于 BCP+MT+DMSO组（P<0.01）,BCP+MT+EA-BN+PBS 组高于 BCP+MT+EA-BN+IGF-1 组（P<0.01）。与 BCP+MT+DMSO 组相比,BCP+MT+LY294002 组大鼠 SCDH 中 p-Akt、p-JNK1/2、β-arrestin2 蛋白相对表达均降低（P<0.05,P<0.01）。结论提前介入骨边刺结合电针可以减轻或延缓吗啡耐受现象,该效应可能与抑制PI3K/Akt/JNK1/2信号通路有关。
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