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目的:研究金钗石斛总生物碱(DNLA)对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法:(1)将60只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、DNLA正常给药组(20mg/kg)、CCl4模型组、DNLA低剂量组(10 mg/kg)、DNLA高剂量组(20 mg/kg)和联苯双酯组(150 mg/kg),每组10只。小鼠给予相应药物连续灌胃7 d,正常对照组和CCl4模型组给予等体积蒸馏水,末次给药2 h后,腹腔注射0.2%CCl4溶液(0.1mL/10 g)致小鼠急性肝损伤,24 h后,处死小鼠并取肝脏和血清样本。测定小鼠血清ALT和AST含量,制备肝脏组织匀浆检测丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)活性,苏木精-伊红染色法(HE)观察肝脏组织病理学变化,透射电镜观察肝脏组织超微结构变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2核蛋白及其下游靶蛋白GCLC、NQO1和HO-1的表达水平。(2)将野生型(WT)和Nrf2基因敲除(Nrf2-/-)小鼠随机分为正常对照组、DNLA正常给药组(20 mg/kg)、CCl4模型组和DNLA给药组(20 mg/kg),每组6只,给药、处置及检测方法同上。结果:(1)与正常对照组相比,CCl4模型组小鼠血清ALT、AST含量显著增加,肝脏组织中MDA含量升高,SOD和GSH活性明显降低,病理检查可见肝细胞坏死等病变,同时,肝细胞线粒体出现明显肿胀,肝细胞核膜皱缩、不完整,异染色质明显增加、浓缩边集,肝细胞核内蛋白Nrf2的表达水平有降低趋势,而总蛋白NQO1、HO-1和GCLC的表达水平升高;与CCl4模型组相比,DNLA给药组小鼠血清中ALT、AST的含量明显降低,肝脏组织中SOD、GSH活性明显升高,而MDA含量明显降低,病理学检查结果显示肝脏病理损伤明显减轻,肝脏线粒体的损伤显著改善,Western bolt结果显示DNLA低、高剂量组Nrf2、GCLC、NQO1及HO-1的蛋白表达均明显增加。(2)与正常对照组比较,Nrf2-/-小鼠CCl4模型组血清中ALT、AST含量较WT小鼠明显升高,肝脏组织病理学检查也显示Nrf2-/-小鼠肝损伤程度较WT小鼠更为严重;DNLA给药后,CCl4诱导的WT小鼠血清ALT和AST的升高被显著抑制,但对Nrf2-/-小鼠血清ALT和AST的升高无明显抑制作用,DNLA能减轻WT小鼠的肝脏病理损伤,但对Nrf2-/-小鼠肝脏病理损伤并无明显改善;Western bolt结果显示,给予DNLA后,WT组小鼠肝脏GCLC、NQO1、GST、GPX1蛋白质的表达均明显增高,但在Nrf2-/-小鼠中未见显著差异。结论:DNLA可显著减轻CCl4诱导的小鼠急性肝损伤,其作用机制可能与增加肝脏抗氧化应激性损伤相关蛋白Nrf2、GCLC、NQO1和HO-1等的表达有关。