量子点生物探针及其在病毒检测和示踪中的应用

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在过去十年中,半导体量子点作为一种纳米尺寸的晶体材料,在生物医学领域引起了很多研究人员的极大关注。与传统染料以及荧光蛋白相比,量子点具有独特的光学特性,比如随尺寸大小变化的发射光谱、高亮度、超强抗光漂白的光稳定性以及同时可激发多种荧光。这些特性使量子点及其偶联物做为一种可靠的光学标记,在固定细胞标记、活细胞动态成像、组织原位分析、荧光检测以及动物体内成像等生物领域有着广泛的应用。  本研究建立了一种使用量子点进行荧光原位杂交,检测鼠痘病毒基因组的方法。在PCR获得探针的过程中,使用生物素化的dUTP(biotin-dUTP)部分取代dTTP,从而得到生物素标记的双链DNA探针。然后,利用生物素-亲和素反应,我们可以高效而敏感使用链霉亲和素偶联的量子点来显示鼠痘病毒基因组在细胞以及组织中的存在。实验结果表明,该方法可以充分的可视化被感染Vero细胞以及小鼠中鼠痘病毒基因组。相比较如地高辛传统有机染料,量子点荧光原位杂交的信号更强,受到组织自发荧光的干扰更小。把量子点应用到病毒的实时示踪中去。我们使用量子点标记囊膜蛋白GP64的重组杆状病毒和荧光标记动态成像技术,实现单颗粒杆状病毒(AcMNPV)感染昆虫细胞和转导不同类型哺乳动物细胞的动态示踪。实验结果显示,该方法能得到较完整的量子点标记病毒颗粒,我们能成功的观测到单颗粒杆状病毒侵染昆虫和转导哺乳动物细胞细胞的动态过程。另外,量子点标记的重组杆状病毒对于不同哺乳动物细胞的转导效率是有差异的。使用使用两种新的癌症标志物核仁素和间皮素的纳米抗体标记上量子点进行癌症的检测。但实验结果显示,在没有偶联抗体的情况下,NTA活化的羧基量子点能直接与乳腺癌组织结合。在正常乳腺组织以及别的癌症组织上并没有发现这种现象,而未活化的羧基量子点也不能与癌症组织结合。我们推测这与组织中的镉元素或其他种类的重金属含量有关联,这有待进一步实验的证实。
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