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新孢子虫病(Neosporosis)是由新孢子虫寄生于犬、牛、羊等多种动物细胞内所引起的一种原虫病。该病造成病牛流产、死胎及产弱胎,对畜牧业生产造成重大的经济损失。目前,仍没防治该病的有效药物和疫苗,及时检测、诊断,淘汰患畜是唯一的防治途径。因此,地方虫株的分离、体外培养、研发和应用灵敏、快速的检测试剂盒等,对该病的早期诊断、流行病学研究、治疗和防控具有重大意义。(Ⅰ)本实验以贴壁培养的Vero细胞为供养细胞接种新孢子虫速殖子,建立新孢子虫新疆株Nc-1的初始培养。借助显微镜每隔24h观察新孢子虫速殖子在Vero细胞中的寄生、增殖情况,并摸索其最佳传代、保存、复苏等试验条件。结果显示：在5%CO2,37℃条件下,在DMEM培养基中培养,获得生长旺盛、对数生长期的Vero细胞；在此基础上成功建立了新孢子虫新疆株Nc-1速殖子的体外培养。试验表明新孢子虫新疆株Nc-1速殖子可在Vero细胞中稳定增值,其最佳培养基为RPMI-1640(含有100μg/mL双抗和5%胎牛血清)；其培养条件为5%CO2,37℃；虫株冻存后最佳复苏和保存时间为半年。本次试验为实验室条件下开展新孢子虫地方虫株的扩繁、提供虫体实物材料以及新孢子虫的深入研究提供丰富的材料,为新孢子虫的防治研究奠定基础。(Ⅱ)本实验分批次地诱导纯化新孢子虫重组抗原NcSRS2t,运用制备的NcSRS2t抗原为包被抗原组装了4个批次的试剂盒；并对试剂盒的敏感性、特异性、重复性和保存期以及样品检测(N=1613)效果等进行了临床验证试验。结果显示,在敏感性试验中,试剂盒在阳性血清1：1600倍稀释时仍能检测到抗体；批内和批间重复检测,变异系数均小于10%；自制组装的试剂与IDEXX商品试剂盒的检测结果符合率为97.5%；与Bio-X商品试剂盒的检测结果符合率为98.0%。运用组装的试剂盒检测牛血清样品(N=1613),检测出新孢子虫抗体阳性血清样品212份,其阳性率为13.1%,其结果亦被商品化试剂盒验证。以上结果表明自制组装的试剂盒敏感性较高、特异性和重复性较好,可用于该病的临床检测。(Ⅲ)本试验通过应用组装的新孢子虫NcSRS2t-rELISA试剂盒对对采自新疆和静县的543份绒山羊血清进行了新孢子虫抗体检测。结果显示,绒山羊群中新孢子虫的平均抗体阳性率为13.8%。样品采集的33个羊群中有51.5%的羊群感染率在10%-20%之间。有流产史的样品的新孢子虫抗体平均阳性率比随机样品高,但是新孢子虫病是否是导致我区绒山羊流产的主要原因,还有待进一步的调查研究。