茭白黑粉菌的分离鉴定及其与茭白互作的初步研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lvlianpeng2009
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茭白(Zizania latifolia)为多年水生草本植物,主要分布于亚洲东部,是国内第二大水生蔬菜。茭白黑粉菌(Ustilago esculenta)属于担子菌亚门黑粉菌科,其侵染茭白植株能够引起植株茎部膨大形成可食用的茭白。茭白肉质茎的形成与茭白黑粉菌侵染密切相关。茭白肉质茎的膨大过程是茭白黑粉菌侵染茭白植株,并在其中生长从而诱发茭白植株产生系列应激响应的过程。本研究通过体外分离培养得到两种茭白黑粉菌,对两种黑粉菌进行形态以及分子鉴定;研究其茭白黑粉菌形态以及其生物学特性;分析在体外培养下不同碳源以及酸碱度对两种黑粉菌生长的影响;初步分析不同表型茭白膨大期间的差异。主要结果如下:1、本研究通过切片法和稀释涂抹法,分别从正常茭白和灰茭中成功分离得到正常茭白黑粉菌(M-T型)和灰茭黑粉菌(T型)。通过形态鉴定以及通用引物扩增ITS-5.8s DNA分子鉴定,将提取得到的两种黑粉菌与已知NCBI中茭白黑粉菌序列比对,其同源性在99%以上。与M-T型茭白黑粉菌目的序列比对,T型黑粉菌目的条带序列比对中有个别碱基的替换、插入。2、进一步对T型和M-T型茭白黑粉菌的研究表明两者存在较大的差异,在不同的碳源培养基上T型黑粉菌适应性较强,较能承受营养因素变化的影响。在不同酸碱度下,M-T型黑粉菌较为敏感。在碳源或者酸碱度同一条件下,灰茭T型黑粉菌生长速率明显大于正常茭M-T型黑粉菌。3、通过茭白孕茭前后不同生长时期指标变化和显微观察表明,正常茭白与灰茭的肉质茎形态指标变化具有明显的差异,正常茭白的肉质茎长度、横茎和净重明显大于灰茭。在茭白孕茭膨大期间,茭白孕茭前黑粉菌开始大量增殖,正常茭白肉质茎内黑粉菌常以菌丝态形式存在,孕茭后期才出现零星冬孢子;而灰茭冬孢子遍布孕茭后整个发育时期。茭白肉质茎空腔大小与黑粉菌孢子的数量有关。4、通过测定正常茭和灰茭中碳水化合物含量以及糖酶的变化表明,正常茭和灰茭中各蔗糖、果糖、淀粉、可溶性总糖和葡萄糖含量变化趋势差异显著。在茭白孕茭开始膨大时,由于黑粉菌大量增殖,肉质茎碳水化合物含量迅速增加,而到茭白孕茭成熟后期,碳水化合物含量有所下降。在茭白膨大过程中,灰茭T型黑粉菌在茭白刚孕茭便形成冬孢子,灰茭肉质茎可溶性总糖、蔗糖、淀粉和葡萄糖含量显著小于正常茭白。在茭白膨大过程中,正常茭白和灰茭茭白的酸性转化酶处于下降的趋势,正常茭白和灰茭茭白磷酸蔗糖合成酶活性呈现先快速升高后下降的趋势,这与茭白肉质茎形成黑粉菌的增殖有关。
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