硫酸钙对MG63细胞OPG/RANKL系统的影响

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目的:通过设计细胞学实验意图丰富硫酸钙(calcium sulfate,CS)促进骨形成能力的细胞分子水平证据,初步探讨硫酸钙对成骨样MG63细胞增殖情况和对骨保护素(osteoprotegerin,OPG)及核因子κβ受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κβligand,RANKL)表达的影响,为寻找硫酸钙促进成骨机制提供体外实验证据。方法:1.制作硫酸钙人工骨浸提液,将含硫酸钙人工骨浸提液的细胞培养基设为实验组,不含硫酸钙的细胞培养基设为对照组,观察MG63细胞培养株生长情况,并通过CCK-8实验检测两组MG63细胞在不同条件下的增殖活性。2.利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real Time PCR,RT-qPCR)技术检测MG63细胞OPG和RANKL的mRNA表达水平,并用Western-blot技术检测其蛋白表达产物,并同实验组比较。3.分析实验结果,计量资料采用(?x±s)表示,采取独立样本t检验;按检验水准P<0.05表示差异具有统计学意义。结果:1.两组细胞株生长情况较好,在CCK-8增殖试验中,在24h和72h时,含硫酸钙人工骨浸提液的细胞培养基培养的MG63细胞的吸光度值显著高于对照组(P<0.05)。2.含硫酸钙人工骨浸提液的细胞培养基的MG63细胞与对照组相比,OPG在mRNA及蛋白水平的表达均显著升高,RANKL在mRNA及蛋白表达水平均显著降低,其差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:硫酸钙一定程度上能促进成骨细胞的增殖,对于骨形成有促进作用,而且能促进OPG的表达,抑制RANKL的表达,从而通过OPG/RANKL/RANK信号通路,抑制骨吸收作用,间接增强了成骨作用。
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