【摘 要】
：
目的:慢性髓细胞白血病（Chronic myeloid leukemia,CML）的分子病理基础为具有酪氨酸激酶活性的BCR-ABL1融合蛋白,酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine kinase inhibitors,TKIs）被用作一线治疗药物以诱导CML患者的长期疾病缓解。CML患者对TKIs耐药仍然是临床治疗的主要问题,其机制还未完全阐明。自噬可在化疗药物刺激下保护癌细胞,从而在癌细胞耐药中发
论文部分内容阅读
目的:慢性髓细胞白血病（Chronic myeloid leukemia,CML）的分子病理基础为具有酪氨酸激酶活性的BCR-ABL1融合蛋白,酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine kinase inhibitors,TKIs）被用作一线治疗药物以诱导CML患者的长期疾病缓解。CML患者对TKIs耐药仍然是临床治疗的主要问题,其机制还未完全阐明。自噬可在化疗药物刺激下保护癌细胞,从而在癌细胞耐药中发挥重要作用。长链非编码RNAs（Long non-coding RNAs,Lnc RNAs）可在肿瘤自噬相关性耐药中发挥调控作用。该课题拟在分析GEO数据库中来自CML临床标本的单细胞测序数据的基础上,筛选和CML耐药相关的lncRNA,并探讨该lncRNA在CML细胞自噬相关耐药中的作用。采取的研究方法主要有:1.通过Western blot和免疫荧光评估CML耐药的细胞系K562/G01及其亲本细胞K562中的自噬活性。然后通过CCK-8检测自噬抑制后K562/G01细胞对第一代TKI伊马替尼（Imatinib,IM）的敏感性变化。2.通过分析GEO数据集GSE76312的临床标本数据,筛选与CML耐药相关的目标lncRNA。然后通过RT-q PCR验证该lncRNA在敏感和耐药的CML细胞系中的表达。通过CCK-8,流式细胞术,克隆形成实验检测该lncRNA敲低后K562/G01细胞对IM的敏感性变化。Western blot和免疫荧光检测lncRNA敲低后CML细胞中自噬活性的变化。3.通过胞质胞核RNA分离实验检测目标lncRNA在CML细胞中的定位情况。star Base数据库预测该lncRNA可能调控的m RNA,通过RT-q PCR和Western blot明确OIP5-AS1敲低后该m RNA的变化。用数据库预测可能与目标lncRNA和m RNA共同结合的miRNAs,并通过RNA免疫沉淀实验,双荧光素酶报告实验检测目标lncRNA、miRNA和m RNA三者的结合情况。主要的结果与结论:1.K562/G01细胞中的自噬活性比K562细胞强,可通过抑制自噬使CML细胞对IM的敏感性增强。表明自噬与CML细胞的IM耐药相关。2.通过分析GEO单细胞测序数据,发现lncRNA OIP5-AS1在对TKIs反应不佳的CML患者LSCs中的表达高于反应良好者。且OIP5-AS1在K562/G01细胞中的表达高于K562细胞。OIP5-AS1敲低后CML细胞对IM的敏感性增加,自噬活性降低。说明OIP5-AS1与CML耐药相关,且可以调控CML细胞自噬相关性耐药。3.OIP5-AS1主要定位于CML细胞胞质中。数据库预测到OIP5-AS1可能调控ATG12,且OIP5-AS1与ATG12呈正相关,OIP5-AS1通过竞争性结合hsa-miR-30e-5p调控ATG12。表明OIP5-AS1可通过调控miR-30e-5p/ATG12轴,促进CML细胞自噬相关性IM耐药。
其他文献
目的牙周炎是一种常见的牙周组织慢性炎症性疾病,由牙菌斑中的微生物与宿主免疫反应相互作用引起,最终可导致牙齿支持组织破坏和牙齿脱落。实验动物模型在牙周炎发病机制的研究和治疗方法的探索中发挥着重要作用,丝线结扎是公认的最佳建模方式,由于能够快速诱导牙槽骨丢失,牙周炎症反应,可预测发病时间和部位而具有明显优势。然而由于小鼠口腔及牙体小,在牙间隙插入结扎丝线因操作空间有限而难以实现。因此需要进一步探索新的
目前,慢性肾脏疾病（CKD）仍然被视为全球主要的公共健康问题之一。在CKD的发生发展过程中,肾近端小管上皮细胞（PTECs）的损伤被认为是其核心事件,并且PTECs持续性的损伤会导致其修复过程的失控,导致PTECs发生上皮-间质转化（EMT）,进一步加重PTECs的损伤和肾脏纤维化。在本次研究中,我们通过单侧输尿管结扎（UUO）手术构建慢性肾损伤小鼠模型,对TTC36的功能及其潜在的作用机制进行了
目的:预测肝细胞黏附分子（hepatocyte cell adhesion molecule,HepaCAM）、磷脂酰肌醇-4、5-二磷酸3-激酶催化亚单位α（phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha,PIK3CA）之间的表达相关性及在肿瘤中的表达高低并在组织中验证,随后对两分子表达水平与临床病理参
第一部分 不同激活剂对PRP分泌的外泌体质量和数量的研究目的:选择最佳的PRP激活剂,以获得高质量的外泌体用于下一步的研究方法:（1）使用不同的激活剂（葡萄糖酸钙,凝血酶或两者共同）激活PRP后,收集PRG,进行HE染色观察纤维蛋白分布,上清通过梯度超速离心法获得外泌体。（2）通过TEM,Nanoflow和Western blot比较和分析不同组间外泌体的数量,质量,体积大小和生长因子含量方面的差
目的:苯并芘（benzo（a）pyrene,BaP）是一种普遍存在于环境中内分泌干扰物。课题组前期研究发现BaP暴露会影响胚胎植入及孕早期卵巢黄体功能,但其机制有待深入研究。有研究表明自噬参与了妊娠黄体功能的维持。线粒体自噬作为自噬形式之一,在清除受损线粒体,维持正常线粒体功能方面发挥着重要作用。而线粒体又是体内类固醇激素合成的中心部位,其功能异常将影响卵巢功能。本研究旨在探讨BaP暴露对孕早期卵
外泌体microRNA（exo-miRNA）是一类内源性、非编码、短片段的核糖核酸分子,由于外泌体膜的保护在体液中具有高的稳定性。研究表明,exo-miRNA可作为肿瘤早期诊断、治疗监测和预后判断的可靠生物标志物。目前,传统的外泌体miRNA检测方法（Northern Blot、q RT-PCR、基因芯片和二代测序）存在诸多不足,如:操作繁琐、耗时、灵敏度低、假阳性高等。因此,亟需发展一种简单灵敏
目的通过对乳腺癌（breast cancer,BC）与乳腺良性病变（benign breast disease,BBD）患者血清胆汁酸代谢轮廓进行分析,建立最优的乳腺良恶性病变鉴别诊断模型,并筛选鉴别诊断乳腺良恶性病变的胆汁酸标志物。方法1.2017年11月至2018年1月期间,自重庆医科大学附属第一医院共收集29名乳腺良性病变患者和47名乳腺癌患者,并收集其临床信息,包括年龄、身高、体重、初潮时
目的:分析L-型钙离子通道Cav1.2对骨形态发生蛋白9（Bone Morphogenetic Protein 9,BMP9）诱导的间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）成骨分化的影响,并探究其可能的作用机制。方法:BMP9处理MSCs,qRT-PCR检测电压门控钙离子通道各亚型的基因表达水平,流式细胞术和激光扫描共聚焦显微镜观察BMP9刺激后MSCs胞内Ca2+浓
目的:双向格林手术是单心室类心脏畸形生理矫治的常用手术,Fontan类手术的中间过渡或有Fontan类手术高危因素患者的终结性手术。对于实施格林术后前向肺血流的处理目前仍存在争议,鉴于目前国内格林术后全腔手术完成率偏低的状况,本中心在格林术后均保留前向肺血流,即使术后上腔静脉压力明显偏高也是通过肺动脉捆绑而非截断肺动脉来维系前向肺血流,此次研究回顾了积极维持肺前向血流策略在格林术中应用。方法:20
目的:肺炎链球菌是呼吸道的正常定植菌,但可以通过侵入粘膜屏障引起多种疾病,疫苗是预防其感染的一种有效手段。本课题组前期的研究发现融合蛋白Dna J-ΔA146Ply免疫小鼠后,能产生良好的保护作用。进一步的研究显示,免疫后的IL-4-/-小鼠相较WT小鼠,其生存率显著下降,菌载量升高,提示IL-4在Dna J-ΔA146Ply诱导的免疫效应中发挥了重要作用,但其机制尚不清楚。本研究将探索IL-4参