论文部分内容阅读
目的体内研究验证MEX3C基因对IGF-1蛋白表达及小鼠卵泡发育的影响。方法采用PCR法鉴定4周龄FVB小鼠基因型,鉴定基因后,分为野生型和纯合子型,在此基础上设置4个实验组,每组6只(n=6),分别为野生型组、MEX3C基因敲除小鼠纯合子(简称纯合子组)、纯合子+IGF-1处理组、纯合子+海藻糖(简称处理对照组)。野生型组和纯合子组不做任何处理,纯合子+IGF-1处理组于腹腔注射IGF-1(剂量为10μg/kg.7d),处理对照组给予与处理组等剂量的海藻糖。比较IGF-1注射前(第4周)后(第5周)小鼠体重;于第5周处死小鼠,称重各组小鼠卵巢湿重;ELISA法测定血清中雌二醇(E2)和卵泡刺激素(FSH)水平;HE染色观察各组小鼠卵巢组织形态变化并进行卵泡计数;采用免疫组化法检测MEX3C、胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)、增殖细胞核抗原(PCNA)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT,Ser473)在小鼠卵巢组织中的表达定位;Western blot测定MEX3C、IGF-1R、PCNA和p-AKT(Ser473)蛋白的相对表达。采用SPSS22.0统计软件进行分析,P<0.05表示差异有统计学意义。结果1、MEX3C-/-小鼠体重和卵巢湿重明显轻于野生型组(P<0.001),经IGF-1注射后,与处理对照组相比,纯合子+IGF-1处理组体重增加(P>0.05)。2、MEX3C-/-小鼠血清E2明显低于野生型组,(P<0.01);纯合子+IGF-1处理组血清E2和FSH水平显著高于处理对照组,(P<0.05)。3、HE染色显示,野生型组可见各级卵泡,且成熟卵泡存在,MEX3C-/-小鼠卵巢中可见多个闭锁卵泡,在纯合子+IGF-1处理组可见初级卵泡和窦前卵泡较多。4、与野生型组比较,MEX3C-/-小鼠卵巢中原始卵泡、初级卵泡、窦前卵泡和窦卵泡数目明显减少(均P<0.05),而闭锁卵泡数明显增加(P<0.01),纯合子+IGF-1处理组原始卵泡和初级卵泡数目明显多于处理对照组,而闭锁卵泡数显著减少(均P<0.05)。5、MEX3C-/-小鼠卵巢中MEX3C、IGF-1R、PCNA和p-AKT蛋白相对表达量显著低于野生型组(P<0.01),纯合子+IGF-1处理组IGF-1R、PCNA和p-AKT蛋白表达明显高于处理对照组(P<0.05)。结论1、小鼠体内MEX3C对IGF-1表达起到正向调控作用;2、MEX3C的敲除降低了I GF-1蛋白表达进而抑制卵泡的发育;3、IGF-1可促进MEX3C基因敲除小鼠卵巢卵泡发育,其机制是通过上调IGF-1R和p-AKT水平,提高血清雌激素水平促进卵泡发育。