【摘 要】
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脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）属于小RNA病毒科,心病毒属,是一种人兽共患病病原体,可感染哺乳动物、昆虫、灵长类动物等,其中最主要受感染动物是猪。EMCV感染后猪只产生急性心肌炎、脑炎、母猪繁殖障碍,严重者突然死亡,对养猪业造成严重的经济损失。研究表明其基因组可以容纳一定长度的外源片段。口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth d
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脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）属于小RNA病毒科,心病毒属,是一种人兽共患病病原体,可感染哺乳动物、昆虫、灵长类动物等,其中最主要受感染动物是猪。EMCV感染后猪只产生急性心肌炎、脑炎、母猪繁殖障碍,严重者突然死亡,对养猪业造成严重的经济损失。研究表明其基因组可以容纳一定长度的外源片段。口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）引起的一种急性、高度接触性传染病,危害及其广泛。目前FMD防控的主要手段是疫苗免疫。FMDV VP1蛋白是病毒的主要免疫抗原。因此本研究以EMCV病毒为骨架,在L蛋白插入O型FMDVVP1全长、抗原表位以及抗原表位重复序列,并且以FMDV VP1置换EMCV VP1序列,构建EMCV嵌合病毒,制备重组EMCV疫苗,对两种疾病进行预防,并且为后续小RNA病毒科嵌合病毒以及新型疫苗的开发提供理论依据。本研究利用实验室前期构建的EMCV反向遗传系统,以EMCV BD2株全长cDNA感染性克隆为骨架,将O型FMDV VP1结构蛋白的B细胞表位（135-160位、200-213位氨基酸）以及T细胞表位（21-40位aa）串联插入到EMCV基因组中,并将FMDV VP1全长置换EMCV VP1构建嵌合质粒。将重组质粒转染BSR T7/5细胞对重组病毒进行拯救,传至5代,通过IFA、一步生长曲线以及F1-F5代遗传稳定性对其进行鉴定。结果表明,插入FMDV VP1全长、VP1（TB）、VP1（2TB）以及置换VP1的重组质粒酶切验证分别得到1399bp、990bp、1248bp、3754bp的目的片段并通过测序表明重组质粒构建成功;除置换EMCV VP1嵌合病毒外,其它重组病毒均拯救成功,分别命名为 EMCV/RvBD2W-VP1、EMCV/RvBD2W-VP1（TB）、EMCV/RvBD2W-VP1（2TB）,并可以在BHK-21细胞上产生完整的病毒颗粒,病毒毒价分别为107.85TCID50/mL、108.06TCID50/mL、107.76TCID50/mL。重组病毒 EMCV/RvBD2W-VP1（TB）F5代内可以稳定遗传,病毒复制能力与亲本病毒相似;重组病毒EMCV/RvBD2W-VP1、EMCV/RvBD2W-VP1（2TB）均在连续传代过程出现不同程度的缺失,并且在BHK-21细胞上复制能力降低,这表明较长片段插入导致的缺失可能会对EMCV病毒颗粒的包装、释放等方面产生影响。为了评价重组病毒的免疫原性,分别将亲本病毒和重组病毒制备灭活疫苗免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA方法检测血清中两种病毒的特异性抗体,结果显示所有免疫组均可检测到EMCV-VP1特异性抗体,重组病毒EMCV/RvBD2W-VP1（TB）灭活疫苗还可以诱导FMDV-VP1特异性抗体的产生。
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