茶叶中氰戊菊酯酶联免疫检测方法的研究

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本论文对茶叶中农药氰戊菊酯残留的免疫学检测方法进行了深入系统的研究。研究了半抗原与载体蛋白结合的方法,制备出高效价的氰戊菊酯抗体。建立了简便、快捷、实用的氰戊菊酯免疫学检测方法-直接竞争酶联免疫检测方法。分别对所建立方法的性能指标进行了系统评价,考察了方法检测限、精密度、准确度。通过对氰戊菊酯特异性部分(2-(4-氯苯基)-二甲基丁酸)连接氨基己酸甲酯,进行接臂延长,再将酯化物进行酸化得到半抗原,并将半抗原与大分子蛋白的连接后,对大白兔的免疫得到氰戊菊酯的多克隆抗体。利用得到的抗体,进行直接竞争酶联免疫吸附试验(CD-ELISA)。由于氰戊菊酯在茶叶方面应用较多,故将该方法应用到茶叶样品的快速检测中。由于氰戊菊酯具有特殊旋光性,其标准溶液使用0.5mM的氢氧化钠-甲醇溶液进行配制。通过对试验条件的优化(离子浓度、酸碱度、有机溶剂),直接竞争酶联免疫检测方法灵敏度(IC50)为9μg kg-1,检测限(IC15)为0.5μg kg-1。确立了一种简单、快速、有效的茶叶处理方法,在添加回收试验中,回收率达到76.67-91.43%。通过气相色谱检测方法,对建立的氰戊菊酯直接竞争酶联免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果具有较高的相关性,线性相关系数R2值为0.9968。因此,建立的直接竞争酶联免疫检测方法适用于大量茶叶样品的快速检测。
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