黏膜免疫系统是由分布于呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道和乳腺黏膜内的淋巴组织组成的，占据了机体淋巴组织的大部分。机体95﹪以上感染发生在黏膜部位，防治黏膜感染在人类健康中占举足轻重的地位，然而传统的疫苗接种，如皮下注射等，不能有效诱导黏膜部位的免疫应答，只有从黏膜部位接种疫苗才能诱导黏膜免疫应答。近年来，随着人们对黏膜免疫的重视以及相关理论和技术的不断发展，黏膜疫苗的开发成为了当今免疫学的研究热点，因为黏膜疫苗符合原位免疫设计，即在感染的起始阶段起到预防目的旋毛虫的自然感染途径是经口感染，感染后旋毛虫幼虫囊包在胃液及肠液作用下，幼虫自囊包逸出，并钻入十二指肠及空肠上段的肠黏膜中进行发育和繁殖，产于肠黏膜内的新生幼虫侵入局部淋巴结或小静脉，随淋巴或血循环播散至全身致病。所以研究旋毛虫黏膜疫苗的关键是能在感染的起始部位肠道诱导免疫应答，来阻止病原体的入侵。目前，国内外关于旋毛虫黏膜疫苗的研究主要集中在使用全虫抗原作为免疫原，但这些抗原来源有限，且易引发非特异性反应。重组抗原易于制备，安全性好，迄今为止，有关重组抗原用于旋毛虫黏膜免疫的研究尚未见报道。本研究利用旋毛虫Ts87重组抗原经黏膜途径免疫小鼠，观察其能否诱导肠道黏膜免疫应答，即能否在感染的起始阶段起到抗旋毛虫的作用，并初步探讨其作用机制，以期制备抗旋毛虫病的黏膜疫苗。 选择合适的佐剂和从哪个黏膜部位引入抗原是成功研制黏膜疫苗首先要解决的问题。因此，本研究首先探讨Ts87重组蛋白分别联合不同佐剂(氢氧化铝，Al(OH)3；霍乱毒素B亚单位，CT-B； IMS1312；)经口灌胃免疫小鼠诱导产生的免疫保护作用，观察并比较其保护效果，从中选出一种较好的佐剂。150只NIH小鼠随机分成分5组：CT-B+Ts87蛋白组、AI(OH)<,3>+Ts87蛋白组、IMSl312+Ts87蛋白组、单纯Ts87蛋白组和对照组，灌胃免疫，间隔1周共免疫3次。末次免疫后第7d用400条旋毛虫感染期幼虫攻击，比较各组小鼠肠道成虫数、雌虫生殖力和肌幼虫数，并收集肠黏液和血清，检测特异性sIgA、IgG抗体水平。 结果显示：CT-B+Ts87蛋白组成虫减虫率、新生蚴减虫率和肌幼虫减虫率均比其它组高，肠黏液特异性sIgA和血清特异性IgG抗体水平也明显高于其它组。这说明CT-B不仅能诱导肠道黏膜免疫反应，而且能诱导全身免疫反应，并能有效促进虫体排出，是辅助Ts87重组抗原发挥作用的良好黏膜佐剂。其次，比较Ts87重组抗原经不同的黏膜免疫途径接种产生的免疫保护效果。 本研究选择了经口和滴鼻两种最常见的黏膜免疫途径进行实验，以确定哪一种途径通过共同黏膜免疫系统(CMIS)诱导的免疫应答更有效。CT-B联合Ts87重组蛋白分别用灌胃和滴鼻两种途径免疫小鼠，比较各组小鼠肠道成虫数、雌虫生殖力和肌幼虫数；并比较各组小鼠鼻腔冲洗液、肠黏液、血清中特异性抗体水平(slgA、IgG、IgGl、IgG2a)。 结果显示：两种途径都能诱导产生局部黏膜免疫反应(slgA)和全身免疫反应(IgG)，对肠道成虫排出，雌虫生殖力降低均有显著作用，肌幼虫数也明显减少。其中经口服途径接种疫苗，在肠黏膜有很强的免疫反应(产生slgA)出现，而鼻腔无明显的免疫反应；而滴鼻免疫后除了在鼻腔有免疫反应(产生slgA)出现外，肠道也有明显的免疫反应，并且滴鼻免疫可以显著降低免疫原的用量。这提示滴鼻免疫可能是一种更有效、更安全的免疫途径。 为了进一步探讨免疫原诱导产生保护作用的机制，本实验选用CT-B联合Ts87重组蛋白经口接种，观察小鼠肠黏膜形态变化、特异性sIgA抗体水平变化与虫体排出之间的相互关系。实验分4组：免疫组(CT-B+Ts87)、佐剂组(CT-B)、蛋白组(Ts87)和对照组(生理盐水)。各组小鼠于0、14、21d灌胃免疫。末次免疫后第7 d用400条旋毛虫感染期幼虫攻击，在攻击前和攻击后第7、14、28、42 d，各取1 cm左右肠段固定、石蜡包埋、切片染色；并收集肠黏液和血清检测特异性slgA、IgG、IgGl、IgG2a，抗体；同时比较各组小鼠肠道成虫数、雌虫生殖力和肌幼虫数。 结果显示：小鼠经口接种CT-B+Ts87免疫原后，肠道黏膜及黏膜下层单核细胞和浆细胞明显增多，肠道特异性sIgA水平显著升高；攻击感染后虽然小鼠肠黏膜充血，但上皮细胞基本完整，攻击后第7 d肠道内成虫数比对照组、佐剂组或蛋白组明显减少，第14 d全部排出。对照组、佐剂组或蛋白组小鼠攻击感染后，肠黏膜可见糜烂，上皮细胞有坏死脱落，小肠绒毛横断；肠道特异性sIgA水平没有明显升高；攻击后第14 d肠道还有少量成虫未排出。这说明肠道黏膜免疫应答激活产生的特异性sIgA，对促进排虫，阻止虫体入侵以及保护肠黏膜上皮至关重要，在抗旋毛虫感染中发挥了重要作用。 通过以上研究，本文发现Ts87重组蛋白联合黏膜佐剂CT-B灌胃或滴鼻免疫接种，都可以诱导小鼠产生局部和全身抗旋毛虫感染的作用。滴鼻免疫接种能显著降低免疫原的用量，可能是一种更有效、具有应用前景的免疫途径。本研究为制备旋毛虫黏膜疫苗奠定了基础。