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目的:探讨Nrg1-erbb信号通路在小鼠吗啡耐受形成中的作用。 方法:⑴雄性昆明小鼠18只,随机分为两组(n=9):吗啡耐受模型组(MT组)和对照组(NS组)。MT组给予皮下注射吗啡(10mg/kg),NS组皮下注射生理盐水,每日早晚两次,连续注射7天。第1、3、5、7d时用甩尾实验(Tail flick test)测定甩尾延迟时间,计算得出可能的最大镇痛效应值(The percentage of maximal possible antinociceptive effect,%MPE),在吗啡给药第7天测痛结束后,每组三只小鼠,取腰膨大部分,采用Western blot检测各组小鼠脊髓P-erbB2的表达变化,同时每组三只小鼠用real-time PCR检测Nrg1在脊髓的表达情况。余下小鼠以4%多甲灌注后取腰膨大,用免疫荧光染色测定脊髓小胶质细胞激活情况。⑵雄性KM小鼠30只,随机分为五组(n=6):Vehicle+MT组(V+MT组)、lapatinib组(抑制剂,L组)、生理盐水组(SN组)、MT组和lapatinib+MT组(L+MT组)。L组先腹腔注射300μl(1μg/μL)lapatinib,两小时后再皮下给予120μL生理盐水,作为吗啡对照;V+MT组先腹腔给予300μL溶剂(8%DMSO+5%Tween-20+Saline)作为lapatinib的对照,两小时后再皮下给予120μL(2.5μg/μL)吗啡; L+MT组先鞘内给予300μL(1μg/μL)Lapatinib,两小时后再皮下给予120μl(2.5μg/μL)吗啡。如此给药连续7天,每天早晚2次,并在吗啡给药第1、3、5、7d时的上午最后一次给药半小时后用tail flick test测小鼠%MPE,检测Lapatinib对吗啡耐受行为学的影响。在吗啡给药第7天测痛结束后,每组3只小鼠采用速杀,取腰膨大部分,采用Western blot检测各组小鼠脊髓P-erbB2的表达情况。余下小鼠灌注取腰膨大部分,采用免疫荧光观察各组小鼠小胶质细胞活化情况。 结果:①皮下注射吗啡1d,MT组%MPE值最高,即吗啡镇痛效应达最强,而在第3、5、7天,MT组小鼠的 MPE%值逐渐下降,吗啡镇痛效果逐渐减弱,直至吗啡连续给药的第7天,MT组MPE%值显著下降(P<0.001)。表明吗啡耐受模型成功。而对小鼠脊髓处理后,PCR显示与 NS组相比,MT组小鼠脊髓中Nrg1 mRNA水平显著增高(P<0.05)。Western Blot显示,较NS组,MT组小鼠脊髓 erbB2磷酸化水平上调(P<0.05);而免疫荧光的结果及阳性细胞计数得出,与SN组小鼠相比,MT组小鼠脊髓背角的小胶质细胞形态改变,表现为突起回缩,胞体相对增大乃至呈巨噬细胞样,数目显著增多。②甩尾实验测痛显示,L+MT组、MT组及V+MT组MPE%值在给药第一天最高值,并无统计学差异(P>0.05),而给药第3、5、7天,三组MPE%均有下降,L+MT组MPE%值较后两组下降程度低(P<0.001);MT组和V+MT组较 SN及 L组 MPE%值显著下降(P<0.001),MT组与 V+MT组相比MPE%值无统计学差异(P>0.05),SN组与 L组 MPE%无统计学差异(P>0.05)。免疫荧光结果显示,L+MT组小鼠脊髓背角小胶质细胞阳性数目明显少于MT组及V+MT组(P<0.001);而L+MT组与SN组、L组阳性细胞数并无统计学差异(P>0.05)。Western Blot结果显示,L+MT组P-erbb2蛋白表达较MT组、V+MT组下降(P<0.05)。 MT组、V+MT组与L组、SN组相比,P-erbb2蛋白表达明显增高。 结论:Nrg1-erbB信号通路参与了吗啡耐受的形成,其机制可能与Nrg1激活小胶质细胞相关。