【摘 要】
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中药材来源多样化、种植加工分散化,在复杂的中药全产业链任一环节都可能受到真菌污染,在适宜条件下潜在产毒真菌会产生真菌毒素。霉变的中药材不但影响药效、威胁消费者健康,还会影响中药出口贸易、造成经济损失。全面高效鉴定中药材污染真菌是防控真菌污染、保障用药安全的重要基础。本研究利用DNA宏条形码技术对中药材污染真菌进行鉴定研究:从中药材样品表面提取真菌总DNA,利用通用引物扩增ITS1/ITS2（int
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中药材来源多样化、种植加工分散化,在复杂的中药全产业链任一环节都可能受到真菌污染,在适宜条件下潜在产毒真菌会产生真菌毒素。霉变的中药材不但影响药效、威胁消费者健康,还会影响中药出口贸易、造成经济损失。全面高效鉴定中药材污染真菌是防控真菌污染、保障用药安全的重要基础。本研究利用DNA宏条形码技术对中药材污染真菌进行鉴定研究:从中药材样品表面提取真菌总DNA,利用通用引物扩增ITS1/ITS2（internal transcribed spacer 1/2）序列并进行高通量测序。采用97%的相似度水平对有效序列进行OTU聚类,利用UNITE数据库进行物种注释,基于国际核苷酸序列数据库进行BLAST校对,根据聚类及注释结果进行多样性分析、物种组成分析及组间真菌群落差异分析。主要内容及结论如下:（1）肉豆蔻污染真菌鉴定研究。对13批市售商品和产地药材进行检测,结果显示肉豆蔻污染真菌共计4门、21纲、58目、115科、174属。门水平优势菌群为子囊菌门Ascomycota（85.89%～99.93%）。属水平优势菌群为曲霉属Aspergillus（4.37%～82.81%）、Xerochrysium（0.36%～55.18%）和耐干霉菌属Xeromyces（0.87%～86.38%）。共鉴定到108种真菌,包含6种有害真菌:烟曲霉A.fumigatus、歧皱青霉Penicillium steckii、短密青霉 P.brevicompactum、胶囊青霉P.capsulatum、球毛壳菌 Chaetomium globosum 及粉红单端胞霉 Trichothecium roseum。（2）巴戟天、益智污染真菌鉴定研究。对两种药材共18批样品进行检测。巴戟天污染真菌优势菌群为子囊菌门（49.53%～94.32%）,优势菌属为青霉属Penicillium（1.86%～76.14%）、枝孢属Cladosporium（1.82%～56.65%）和木霉属Trichoderma（0.12%～19.71%）。益智污染真菌优势菌群为子囊菌门（14.81%～81.85%）,优势菌属为青霉属Penicillium（0.27%～56.06%）、Papiliotrema（0.04%～51.71%）和枝孢属Cladosporium（3.08%～44.41%）。共检测到2种潜在产毒真菌:深绿木霉Trichoderma atroviride和木贼镰刀菌Fusarium equiseti。（3）延胡索污染真菌鉴定研究。对来自5个药材市场的18批样品进行检测,子囊菌门Ascomycota（80.44%～99.98%）为最优势菌群。在属水平,优势菌群为曲霉属 Aspergillus（1.29%～99.45%）、Diutina（0～60.52%）和镰刀菌属Fusarium（0～59.48%）。其中,延胡索和制延胡索中最优势菌群分别为曲霉属和Diutina。共检测到7种有害真菌:烟曲霉A.fumigatus、土曲霉A.terreus、孔曲霉A.ostianus、橘青霉Penicillium citrinum、草酸青霉P.oxalicum、球毛壳菌Chaetomium globosum和粉红单端胞霉Trichothe roseum。综上,DNA宏条形码技术能够实现对肉豆蔻、巴戟天、益智和延胡索药材表面污染真菌种类的鉴定和真菌群落多样性分析,可为预防真菌毒素污染提供早期风险预警。
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