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本论文对谷胱甘肽的提取方法进行了比较和优化,通过复合诱变育种筛选到了富含谷胱甘肽的酵母菌株、并进一步对发酵培养基和发酵条件进行了优化。
通过对谷胱甘肽测定方法的重现性试验,证明此方法重现性好,准确度高,是测定酵母中谷胱甘肽合适的测定方法。对两种谷胱甘肽提取方法的比较表明:热水抽提法更适合提取酵母胞内谷胱甘肽。进一步对热水抽提法的提取条件进行了优化,优化后的条件为:温度90~95℃,时间8min,pH自然,提取液量40mL。
对15株酵母菌的菌体干重及谷胱甘肽产量、含量进行了比较,确定了面包酵母BY-14作为诱变出发菌株。对该菌株进行紫外诱变,以ZnCl2为筛子进行筛选,获得了一株诱变效果较好的菌株B-3,谷胱甘肽产量达到78.23 mg/L,比出发菌株提高了12%;谷胱甘肽含量达到14.82mg/g,比出发菌株提高了11%。
采用均匀分析法优化了突变株B-3的发酵培养基。在此基础上,优化了摇瓶分批发酵条件。与初始条件相比,在优化条件下菌株B-3发酵生产谷胱甘肽的产量为96.72mg/L,比优化前提高了23.63%,谷胱甘肽含量为18.96mg/g,比优化前提高了28%。
以提高突变株B-3的谷胱甘肽产量为目的,采用低能氮离子注入技术,以乙硫氨酸抗性筛选法进行了诱变选育研究。获得了一株具有乙硫氨酸抗性的突变株BL-23,该菌株谷胱甘肽产量比出发菌株提高了17.3%,达到113.46 mg/L;谷胱甘肽含量达到20.86mg/g,比出发菌株提高了10%。