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目的本课题以肝癌细胞株HepG2和原发性肝癌临床病理组织标本为研究对象,观察TLR4(Toll-like receptor 4,TLR4)介导的信号通路对原发性肝癌中IL-23(interleukin-23,IL-23)和IL-17A表达的影响,分析TLR4、IL-23及IL-17A与原发性肝癌临床病理特征的关系,揭示TLR4可经由IL-23/IL-17A炎症轴在原发性肝癌的发生和发展中起作用,为原发性肝癌的临床免疫治疗提供理论和实验依据。方法(1)应用CCK-8法检测TLR4的激活剂LPS(Lipopolysaccharides,LPS)与髓样分化因子-88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)的阻断剂ST2825对HepG2细胞增殖活性的影响。(2)运用ELISA法检测LPS和ST2825对HepG2细胞分泌IL-23与VEGF的影响。(3)用RT-qPCR技术检测HepG2细胞TLR4、IL-23、IL-17A、IL-6、及NF-κB mRNA的转录水平。(4)采用Western-blot法测定HepG2细胞TLR4、IL-23及IL-17A蛋白的表达。(5)收集宁夏医科大学附属医院临床上未经化疗和放疗的肝癌癌标本45例,行临床病理组织分型和临床分期,同时取远端癌旁正常组织20例(均证实无癌细胞)为正常对照,行常规石蜡包埋、切片,免疫组化法检测肝癌组织和远端癌旁组织TLR4、IL-23和IL-17A的表达及与临床病理的关系。结果(1)CCK-8法检测结果显示,与细胞对照组相比较,选用的1 mg/l LPS培养24 h对HepG2细胞无毒且能促进细胞增殖,选用ST2825 40μmol/l的浓度培养8 h对HepG2无毒且则抑制细胞生长。(2)LPS促进了HepG2细胞的IL-23与VEGF的表达量,随时间的增长表达水平升高,阻断MyD88后其表达水平下降。(3)LPS促进HepG2细胞株TLR4、IL-23、IL-17A、IL-6、NF-κB mRNA的转录;阻断MyD88后则IL-23、IL-17A、IL-6、NF-κB mRNA的转录下降。(4)LPS促进HepG2细胞株TLR4、IL-23、IL-17A的蛋白表达,阻断MyD88后IL-23和IL-17A蛋白表达则降低。(5)免疫组化结果显示,肝癌组织和癌旁正常组织中均有TLR4、IL-23及IL-17A的表达,但TLR4、IL-23及IL-17A在肝癌组织的蛋白表达阳性率显著高于远端癌旁的正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05);45例肝癌组织中TLR4、IL-23、IL-17A的蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤发生部位均无统计学意义(P>0.05)。结论(1)TLR4、IL-23及IL-17A参与原发性肝癌的发生与进展。(2)TLR4/MyD88介导的信号转导通路对IL-23/IL-17A炎症轴具有调控作用。