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人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是导致先天性流产和新生儿智力低下的主要病毒病因,并且在人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者中引发严重和致死性的并发症。为探讨HCMV病毒感染和复制的分子机制,本文从3个方面对HCMV病毒的相互作用蛋白进行了系统筛选和功能研究,分别是:(1)运用酵母双杂交技术系统筛选8个HCMV病毒DNA复制蛋白(UL44,UL54,UL57,UL70,UL84,UL102,UL105,UL114)的相互作用细胞蛋白,部分结果进一步进行免疫共沉淀验证。由此发现了包括UBC9、SNAPAP、PIAS3、FHL2、DNAJB6、CTBP2、POLD2、ATRX、PFAAP5 和 ZMYND19 等在内的 130 个能同上述病毒蛋白相互作用的细胞蛋白和154个不同的相互作用关系。结合来源于文献的数据,该结果为全面了解涉及到HCMV病毒DNA复制的宿主-病毒蛋白间相互作用网络通路的复杂性提供了基础,同时也描绘出一个病毒蛋白"由基因至功能"的全过程草图。(2)运用酵母交配技术系统筛选174个HCMV病毒蛋白同16个HIV病毒蛋白间可能的相互作用关系。由此发现了 7个HIV病毒蛋白同7个HCMV病毒蛋白间存在的 12 对相互作用,它们分别是 PR-RL1、Nef-RL1、p17-RL1、p24-RL1、Tat-RL1、p6-RL1、p6-UL119、p6-UL125、IN-RL7、IN-UL24、IN-UL45 和 IN-UL77。这些相互作用的发现,为发展出控制HCMV-HIV病毒共感染、致病的策略和手段提供了一个全新的视角。(3)运用激光共聚集、His pull down和免疫共沉淀等实验手段,从体外和体内证实了 HCMV的ppUL44蛋白同细胞小泛素样修饰E2结合酶UBC9的相互作用,确认了 ppUL44的11-16位和260-269位的这两段氨基酸短区域对结合至关重要。并进一步证实了 ppUL44是一个新发现的小泛素样修饰蛋白(sumo)底物,sumo-1、-2、-3蛋白均可以共价结合到病毒蛋白上,ppUL44位于ψKxE保守序列中的410位赖氨酸是ppUL44主要的小泛素样修饰位点。这些结果证明了 UBC9蛋白同ppUL44的结合、及小泛素样修饰在调节ppUL44的功能和HCMV病毒的复制方面的重要作用。上述3个方面的研究,将有利于阐明病毒基因在致病和复制中的功能,进而深入理解巨细胞病毒的感染机制。