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目的:探讨Cu2+长期胁迫对黑水虻幼虫血细胞的影响,为黑水虻无害化处理粪便技术的实施提供理论依据。 方法:以添加不同浓度Cu2+的人工饲料连续5代饲养黑水虻幼虫,荧光显微镜下观察第1、3、5代5龄幼虫血细胞的形态变化;流式细胞术检测血细胞凋亡率;分光光度法检测血淋巴中总糖、蛋白、脂肪含量和GSH-Px、GST、SOD活性及MDA含量。 结果: (1)第1、3、5代黑水虻幼虫血细胞均在Cu2+处理浓度为600 mg/kg时出现凋亡小体,在1200 mg/kg处理浓度下,血细胞形态出现崩解坏死。 (2)第1、3、5代黑水虻幼虫血细胞凋亡率均在Cu2+处理浓度为75 mg/kg时与对照相比显著降低,在600-1200 mg/kgCu2+处理浓度下血细胞凋亡率随饲料中Cu2+浓度的增加而增加,且显著高于对照和其它处理组的凋亡率;第5代幼虫在Cu2+浓度为150 mg/kg及以上处理浓度时血细胞凋亡率随饲料中Cu2+浓度的增加而增加,且显著高于第1、3代幼虫血细胞的凋亡率。 (3)150-1200 mg/kg处理浓度Cu2+胁迫均显著降低了第5代黑水虻幼虫(0-120 h)的血淋巴中总糖含量。第3代幼虫血淋巴总糖含量除24 h在75-300 mg/kg处理浓度Cu2+胁迫下高于对照组含量外,其他处理浓度下各时间点血淋巴中总糖含量均随饲料中Cu2+浓度的增加而减少。 (4)75-1200 mg/kg处理浓度Cu2+胁迫均显著降低了第3、5代黑水虻幼虫(0-120 h)血淋巴中蛋白含量。除去第1代(0-120 h)幼虫在各个处理浓度Cu2+胁迫下血淋巴中蛋白含量高于对照组含量外,其他世代、各时间点血淋巴中蛋白含量均随饲料中Cu2+浓度的增加而减少。 (5)150-1200 mg/kg处理浓度Cu2+胁迫均显著降低了第3、5代黑水虻幼虫(0-120 h)血淋巴中脂肪含量。除去第1代幼虫0 h和24 h各处理组外,第1、3、5代黑水虻幼虫在150 mg/kg及以上处理浓度Cu2+胁迫下(0-120 h)血淋巴中脂肪含量均随饲料中Cu2+浓度的增加而减少。 (6)第1、3、5代黑水虻幼虫血淋巴中GSH-Px活性均随饲料中Cu2+浓度和胁迫世代的增加而降低。 (7)第1、3、5代黑水虻幼虫血淋巴中SOD活性均随饲料中Cu2+浓度的增加呈下降的趋势且均低于对照组活性;300-1200 mg/kg处理浓度Cu2+胁迫下第3代幼虫血淋巴SOD活性均显著高于第1、5代幼虫的活性。 (8)受不同浓度Cu2+胁迫的第1、3、5代黑水虻幼虫血淋巴中GST活性的变化没有明显规律性。 (9)第1、3、5代黑水虻幼虫血淋巴中 MDA含量与饲料中 Cu2+浓度正相关,且Cu2+处理浓度为1200 mg/kg时第1、3、5代黑水虻幼虫血淋巴中MDA含量均显著高于75 mg/kg处理组及对照组的MDA含量。 结论: (1) Cu2+处理浓度为1200 mg/kg时可显著诱导第1、3、5代黑水虻幼虫血细胞的凋亡,且细胞形态出现崩解坏死。 (2)150-1200 mg/kg处理浓度Cu2+胁迫均显著降低了第5代黑水虻幼虫(0-120 h)血淋巴中总糖、蛋白及脂肪含量,且均随饲料中Cu2+浓度的增加而减少。 (3)随饲料中Cu2+浓度的增加,第1、3、5代黑水虻幼虫血淋巴中GSH-Px活性均降低,SOD活性呈下降的趋势,GST活性变化没有明显规律性。 (4) Cu2+处理浓度为1200 mg/kg时可显著诱导第1、3、5代黑水虻幼虫脂质过氧化作用;第1、3、5代黑水虻幼虫血淋巴MDA含量与饲料中Cu2+浓度存在浓度依赖效应。