【摘 要】
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目的:阐明mi R-378d调控食管癌多倍体的分子机制,以及该机制对食管癌细胞恶性表型的影响。方法:本课题通过构建沉默表达mi R-378d的慢病毒稳转食管癌细胞株（mi R-378d-inhibitor）,并通过细胞克隆形成实验、细胞三维培养实验、Transwell实验、3D微孔支架实验以及免疫荧光（IF）实验研究沉默mi R-378d后多倍体的恶性表型特征;通过Feulgen染色及DI分析多倍
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目的:阐明mi R-378d调控食管癌多倍体的分子机制,以及该机制对食管癌细胞恶性表型的影响。方法:本课题通过构建沉默表达mi R-378d的慢病毒稳转食管癌细胞株（mi R-378d-inhibitor）,并通过细胞克隆形成实验、细胞三维培养实验、Transwell实验、3D微孔支架实验以及免疫荧光（IF）实验研究沉默mi R-378d后多倍体的恶性表型特征;通过Feulgen染色及DI分析多倍体细胞的比例,通过基因富集分析筛选出mi R-378d调控以及多倍体相关信号通路;构建H2B-mcherry融合表达食管癌细胞系（细胞核呈现红色）,通过活细胞成像观察有丝分裂和多倍体形成;通过Western Blotting检测mi R-378d调控以及多倍体相关信号通路核心分子的表达;最后,利用HE和免疫荧光染色对H2B-mcherry融合表达细胞系进行多倍体的形态学分析。结果:mi R-378d沉默表达促进食管癌细胞克隆形成、多极有丝分裂、迁移、侵袭及多倍体肿瘤细胞形成;活细胞成像实验表明抑制Rho A后产生双核/多倍体细胞;Western Blotting实验表明沉默mi R-378d下调Rho A的表达;且AKT正调控Rho A的表达;Western Blotting及Feulgen染色实验表明联合抑制Rho A和AKT显著下调Rho A的表达,并促进多倍体肿瘤细胞的产生;HE和免疫荧光染色实验表明Rho A和AKT抑制后肿瘤细胞体积显著增大;β-半乳糖苷酶染色显示PTX、抑制AKT和Rho A后产生的细胞不是衰老细胞。结论:沉默mi R-378d促进ESCC细胞多倍体的形成和恶性表型;AKT和Rho A共同调控食管癌细胞的多倍体化和去多倍体化;mi R-378d通过AKT和Rho A调控降低食管癌细胞多倍体比例进而促进食管癌细胞恶性表型。
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