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衰老是生物体正常生命活动的自然现象,随着年龄的增长,人体的机能水平会出现显著性的变化。老年人在年龄增长的过程中,会出现一定的肥胖倾向,这种“中老年肥胖”严重影响了中老年人的生活质量和身体活动能力。“炎症学说”理论成为了解释肥胖引起糖尿病的新理论,即肥胖患者机体一直处于一定的低度炎症状态,而这种炎症反应也成为肥胖与糖尿病的中间桥梁,解释了肥胖患者易患Ⅱ型糖尿病的机理机制。炎症反应是由多种因素引起的,AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路是与能量代谢密切相关的一条信号通路,它介导的炎症反应受到机体能量代谢改变的影响。其中AMPK是能量代谢的感受器,它会激活下游分子SIRT1, SIRT1的激活会抑制NF-κB的活性,进而影响炎症反应的发生发展。在衰老的过程中,机体的炎症状态加剧,而有规律的长期运动(如抗阻运动)有利于减轻机体的炎症状态,减少肥胖的发生,可以有效预防胰岛素抵抗和Ⅱ型糖尿病。目的:本研究拟通过观察和探究衰老小鼠肝脏的炎症状态和AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路各蛋白的表达以及抗阻训练对其炎症反应和AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路各蛋白表达的影响。试阐述抗阻训练对衰老小鼠肝脏中AMPK/SIRT1/NF-K B信号通路介导的炎症反应的影响机制。探讨运动的抗炎性作用,为减轻老年后产生的肥胖倾向以及胰岛素抵抗倾向提供新思路。方法:购买清洁级C57BL/6雄性小鼠22只,周龄为12周。第一批购买14只,将其随机分为老年安静组(0C)、老年运动组(OR),每组7只;第二批购买8只,为青年安静组(YC)。老年组小鼠常规饲养至18月龄,其中老年运动组进行一周适应性训练后,接着进行8周爬梯运动,每周3次。断颈处死小鼠后,取出肝脏组织,通过实时定量PCR仪测定AMPK、SIRT1、NF-κB和TNF-α mRNA的表达量,Western Blotting技术测定AMPK和NF-κB的蛋白表达量。结果:1、OC组小鼠肝脏TNF-αmRNA表达量略低于YC组,但并没有显著性的差异(P>0.05),OR组小鼠肝脏TNF-αmRNA表达量明显高于OC组,并且有显著性的差异(P<0.05),表明了抗阻运动可以显著提高小鼠肝脏TNF-a mRNA表达量。2、在基因转录水平方面,三组小鼠肝脏中AMPK mRNA表达量都无显著性差异(p>0.05)。其中OC组与YC组相比,OC组小鼠肝脏中AMPK mRNA表达量略有下降;OR组与OC组相比,OR组小鼠肝脏中AMPK mRNA表达量略有升高。在蛋白的表达方面,三组小鼠肝脏AMPK蛋白表达量均没有显著性差异(P>0.05)。其中OC组小鼠肝脏AMPK蛋白表达量略低于YC组;OR组与OC组相比,OR组小鼠肝脏AMPK蛋白表达量略高于OC组。在酶活性方面,OC组与YC相比,OC组小鼠肝脏组织中AMPK酶活性相对较低,并且具有显著性差异(p<0.05);OR组与OC组相比,OR组小鼠肝脏内AMPK酶活性仅有轻微的升高,没有显著性差异(p>0.05)。3、OC组小鼠肝脏SIRT1mRNA表达量低于YC组,并且有显著性的差异(P<0.05);OR组小鼠肝脏SIRT1mRNA表达量高于OC组,并且有显著性的差异(P<0.05),表明了抗阻运动可以提高小鼠肝脏SIRT1mRNA表达量。4、在基因转录水平方面,三组小鼠肝脏NF-κB mRNA表达量之间并没有显著性差异(P>0.05)。OC组小鼠肝脏NF-κB mRNA表达量略低于YC组,OR组小鼠肝脏NF-κB mRNA表达量相比OC组,有升高的倾向。在蛋白的表达方面,OC组小鼠肝脏NF-κB蛋白表达量略高于YC组,没有显著性的差异(P>0.05)。OR组小鼠肝脏NF-κB蛋白表达量明显高于OC组,有显著性的差异(P<0.05),表明了抗阻训练可以提高小鼠肝脏NF-κB蛋白表达量。结论:1、衰老对小鼠肝脏中TNF-αmRNA的表达没有影响,抗阻训练增加了小鼠肝脏中TNF-αmRNA的表达,说明长期抗阻训练增强了小鼠肝脏中的炎症状态,这可能是由于抗阻训练强度过大引起的。2、随着年龄的增长,小鼠肝脏中AMPK mRNA的表达以及蛋白的表达没有发生变化,然而小鼠肝脏中AMPK酶活性显著下降,说明衰老可以降低小鼠肝脏中AMPK的酶活性。长期抗阻训练对小鼠肝脏中AMPK mRNA的表达以及蛋白的表达没有影响,这可能是由于抗阻训练方式对AMPK的影响不明显,也可能是由于肝脏中的AMPK对抗阻训练不敏感。3、衰老使小鼠肝脏中SIRT1mRNA的表达下调,说明年龄的增长降低了肝脏中SIRT1的水平。随着年龄的增长,AMPK的活性会下降,AMPK活性的下降使SIRT1的水平也下降,推测衰老可能降低了机体的能量代谢。而长期的抗阻训练能够增强肝脏SIRT1的基因转录水平,间接说明了抗阻训练能够在一定程度上改善机体的能量代谢。4、衰老对NF-κB mRNA的表达没有影响,但是抗阻训练却显著增加了小鼠肝脏中NF-κB蛋白的表达,表明了长期抗阻训练使小鼠肝脏的炎症反应有一定程度的增强。5、长期抗阻训练可能并不是通过AMPK/SIRTl/NF-κB信号通路来影响小鼠肝脏中炎症反应的,很可能是通过其它信号通路对肝脏炎症反应产生影响。这也提示抗阻训练的抗炎机制研究还要从其它角度进行分析。