目的:为了解决供体真皮不足和三维血管网络缺乏的问题,基于细胞膜片技术,本论文构建了新型预血管化组织工程真皮用于裸鼠背部真皮缺损的修复,并利用组织化学及免疫组织化学法对其愈合效果进行评估,为临床中真皮缺损的修复研究提供可行性及一定的实验依据。方法:1)预血管化组织工程真皮(PTED)的构建及表征:贴壁法分离兔胫骨骨髓间充质干细胞(BMSCs);运用MTT法测定BMSCs的生长曲线;对BMSCs进行表面标记物鉴定;检测BMSCs的多向分化功能;孵育成纤维细胞(Fb)及内皮细胞(ECs);分别高密度接种BMSCs及Fb并培养至膜片后接种ECs,共培养5天后形成预血管化骨髓间充质干细胞膜片(PBMCS)和预血管化成纤维膜片(PFCS),最终通过叠加或折叠来构建PTED;运用CD31免疫荧光对PBMCS和PFCS进行观察及检测。2)PTED组、PBMCS组和PFCS组对裸鼠背部真皮缺损的修复实验:裸鼠背部真皮缺损的模型构建;将构建的PTED、PBMCS和PFCS分别植入裸鼠背部真皮缺损处,分别观察第1、7、14天的创面愈合情况,利用组织化学及免疫组织化学法对其愈合效果进行评估。结果:1)BMSCs在倒置光学显微镜下呈长梭形,MTT实验结果显示在P2代BMSCs大致呈“S”型生长曲线;BMSCs的免疫组化鉴定显示BMSCs对表面标记物CD29,CD44,CD90呈阳性表达;茜素红,阿利新蓝及油红O染色显示BMSCs具有分化为成骨,成软骨,成脂肪的多向分化潜能;免疫荧光染色显示ECs在骨髓间充质干细胞膜片(BMCS)及成纤维细胞膜片(FCS)上进行迁移,在FCS中更利于预血管化结构生成。2)将构建的PTED、PBMCS和PFCS分别植入裸鼠背部真皮缺损创面,用组织化学和免疫组织化学方法分别在第1、7、14天对创面愈合效果进行定量分析,结果表明,PTED能迅速促进创面愈合,尤其在第14天,3层PTED组创面愈合率高达97.2%(P<0.01),愈合率较空白对照组(89.1%)、PBMCS(92.4%)、PFCS(93.8%)、6层PTED(92.3%)显著提升;并且PTED组在第14天预血管化密度也高于其他各组。结论:实验结果表明PTED组尤其是3层PTED组更有利于全层真皮缺损的修复和三维血管网络的构建,在真皮缺损修复中具有潜在的应用价值。