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目的:探究本院碳青霉烯类耐药高毒力肺炎克雷伯菌（CR-hv KP）的临床分布特征及分子流行病学情况;研究bla OXA-48-likeCR-hv KP分子流行病学情况以及毒力、耐药机制探讨。方法:1.收集南昌大学第一附属医院2020年4月至2022年3月住院患者各种类型的临床标本,从中分离出碳青霉烯类（即厄他培南、美罗培南或亚胺培南）不敏感的肺炎克雷伯菌分离株（CRKP）,剔除相同患者分离出的重复菌株。所有菌株的物种鉴定通过VITEK 2自动化系统进行鉴定,利用医院住院系统收集患者临床基本信息。使用PCR技术检测blaKPC、blaNDM、blaOXA-48、blaVIM、blaIMP5种碳青霉烯酶耐药基因,同时筛出与毒力质粒p LVPK有关的毒力基因rmp A、rmp A2、iuc A、iro B、peg-344,将其中任意1个或1个以上毒力基因阳性定义为CR-hv KP。利用Graphpad prism 9.0以及SPSS26.0软件进行数据展示及统计学分析。2.筛选出同时携带p LVPK毒力质粒和bla OXA-48-like基因的CR-hv KP菌株,定义为bla OXA-48-likeCR-hv KP,利用VITEK 2 Compact细菌鉴定分析系统对目标菌株进行鉴定和药敏试验。采用PCR法检测bla OXA-48-likeCR-hv KP菌株荚膜血清型基因（K1、K2、K5、K20、K54、K57、K64）,β-内酰胺酶编码基因(bla CTX-M、bla SHV、bla TEM)及质粒复制子分型（PBRT）。利用脉冲场凝胶电泳（PFGE）和多位点序列分型（MLST）对bla OXA-48-likeCR-hv KP进行同源性分析。结合拉丝试验、血清抗性试验、生物膜体外形成试验以及大蜡螟感染模型试验评估bla OXA-48-likeCR-hv KP毒力表型。用S1-PFGE和Southern blot确定8株同时携带3种碳青霉烯类耐药基因(bla OXA-181/OXA-232、bla KPC、bla NDM)CR-hv KP的毒力质粒（rmp A2）位置,接合试验检测碳青霉烯酶耐药质粒的转移性。结果:1.本研究共收集本院2020年4月至2022年3月CRKP菌株217株,CRKP中毒力因子peg-344、rmp A、rmp A2、iuc A以及iro B检出率分别为16.13%、19.35%、73.27%、64.98%、24.42%,blaKPC为主要的耐药基因,占比92.17%,其次是blaOXA-48（23.04%）和blaNDM（11.98%）,blaIMP和blaVIM基因均未检出。CR-hv KP检出率为83.87%,rmp A2基因检出率＞80%,几乎所有的CR-hv KP菌株都携带一个或者一个以上耐药基因。CR-hv KP感染患者平均年龄为55.91±15.37岁,男女感染比例为2.31,总体死亡率为43.41%（79/182）。感染患者科室分布主要为神经外科（21.43%）、急诊科（15.93%）、重症医学科（13.19%）。菌株临床标本主要分离自痰液（37.33%）,感染CR-hv KP好转患者及死亡患者在住院时间≥30天、住院期间有ICU入住史、近期有手术史、合并糖尿病、心脑血管疾病以及菌株分离前暴露抗生素种类≥2种等方面的比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.共检出bla OXA-48-likeCR-hv KP 50株,总检出率为27.47%,常见的OXA-48-like碳青霉烯酶耐药基因为bla OXA-181和bla OXA-232,均携带至少一个广谱β-内酰胺酶基因(bla CTX-M,bla SHV,bla TEM)和碳青霉烯酶基因(bla KPC,bla NDM,bla OXA-48-like)。bla OXA-48-likeCR-hv KP的PBRT以Col E型质粒、Inc F型质粒和Inc X3型质粒为主,Inc F+col E为最主要的复制子分型组合。所有菌株对临床常用的抗菌药物均表现为非常高的耐药性。MLST和PFGE提示存在克隆传播和质粒传播两种遗传关系。bla OXA-48-likeCR-hv KP主要聚集在K64 ST11型和K47 ST15型,毒力表型实验提示bla OXA-48-likeCR-hv KP毒力大小不一,S1-PFGE结果表明bla OXA-48-likeCR-hv KP质粒谱型表现出多样性。首次分离出8株携带3种碳青霉烯类耐药基因(bla KPC、bla OXA-181或OXA-232和bla NDM)CR-hv KP,Southern blot提示均携带p LVPK样毒力质粒,且8株细菌均成功接合到大肠埃希菌EC600中。结论:1.本院CR-hv KP呈现出较高的检出率,CR-hv KP菌株的主要耐药机制为携带bla KPC、bla OXA-48、bla NDM基因,且存在多个耐药基因并存的情况。2.本院最常见的OXA-48-like碳青霉烯酶耐药基因是bla OXA-181和bla OXA-232,主要聚集在K64 ST11和K47 ST15菌株中,体内及体外毒力实验均验证为高毒力菌株,对这类菌我们应当积极检测并采取防控措施。3.首次报道在CR-hv KP分离株中共同产生3个碳青霉烯酶基因(bla KPC+bla NDM+bla OXA-181/OXA-232)和p LVPK样毒力质粒。