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研究背景:肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)作为常见的泌尿系统恶性肿瘤,近年来发病率以每年2%的速度递增。尽管十年来肾细胞癌的筛查和检测手段不断进步,早期小肾细胞癌发现率相比症状性肾细胞癌显著提高,但仍有约20%~30%的肾细胞癌患者在确诊初期就已发生淋巴结转移或静脉内癌栓形成等局部进展期表现。CircRNA是近期肿瘤研究的热点,越来越多的研究表明circRNA通过起miRNA海绵作用从而在肿瘤的发生与发展过程中起至关重要的作用。Circ-Foxo3被报道在多种肿瘤组织中呈显著低表达,可以调控组织细胞的细胞功能,同时抑制肿瘤细胞发展过程,然而其在肾细胞癌发生发展过程中的作用机制仍不明确。目的:本实验旨在检测肾细胞癌中的circ-Foxo3表达水平并进一步分析其潜在的临床意义。方法:利用实时定量反转录聚合酶连锁反应(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测circ-Foxo3在肾细胞癌细胞系及正常肾小管细胞系中的表达水平。收集2016年5月至2016年10月于南京军区南京总医院泌尿外科接受肾根治性切除术的RCC患者的肿瘤及癌旁正常肾组织(距肿瘤边缘>3cm)共26对。经病理科确诊,其中20例肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC),3例乳头状肾细胞癌,2例嫌色肾细胞癌,1例Xp11.2易位/TFE3融合基因相关性肾细胞癌。随机选取其中一对样本进行基因芯片分析。接着采用qRT-PCR法检测RCC组织及对应癌旁组织中circ-Foxo3的表达水平,并分析circ-Foxo3在RCC与对应正常组织中表达的差异性并分析其临床意义。最后分析RCC样本中circ-Foxo3表达水平与临床病理学特征之间相关性以及ccRCC样本中circ-Foxo3表达水平与病理分级(Furhman分级)之间的相关性。结果:1.qRT-PCR检测了三株细胞系中circ-Foxo3表达水平,其中HK2是正常肾小管上皮细胞,A498和Caki-1是两株人肾细胞癌细胞系。结果显示,与HK2细胞比较,A498及Caki-1细胞中circ-Foxo3表达水平显著下调(均P<0.001)。2.基因芯片结果显示circ-Foxo3在肾细胞癌组织中较癌旁正常组织中显著下调。且与hsa-miR-138-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-185-3p、hsa-miR-30c-1-3p、hsa-miR-762存在结合位点。3.应用qRT-PCR检测全部肾细胞癌组织样本及其相对应癌旁组织中circ-Foxo3的表达水平,结果显示,肾细胞癌组织中的相对表达量低于对应癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.001)。其中20例ccRCC样本组织中的相对表达量同样低于对应癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.001)。4.通过接收者操作特征曲线(ROC)分析表明circ-Foxo3表达水平能有效鉴别RCC组与对照组[AUC=0.858(95%CI:0.759,0.957)],具有较高的特异性和敏感度。circ-Foxo3表达水平同样可以鉴别ccRCC组与对照组[AUC为0.805(95%CI:0.671,0.939)],同样具有较高的特异性和敏感度。5.以RCC组织中circ-Foxo3的表达水平cutoff值0.0018为分割点,将肾细胞癌患者分为circ-Foxo3高表达组(n=4)和低表达组(n=22),应用SPSS 20.0进行卡方检验,发现RCC组织中circ-Foxo3表达水平与AJCC分期、患者年龄,性别及肿瘤形态学等临床病理学特征无显著相关性(均P>0.05)。以20例ccRCC中circ-Foxo3的表达水平的cutoff值0.0018为分割点,将ccRCC患者分为circ-Foxo3高表达组(n=4)和低表达组(n=16),结果显示ccRCC组织中circ-Foxo3表达水平与Furhman分级无显著相关性(P>0.05)。结论:1.circ-Foxo3在RCC组织及细胞中均呈显著低表达,可能在RCC的发生及发展中具有重要作用;2.circ-Foxo3可作为诊断RCC的潜在生物标志物。