【摘 要】
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iASPP作为癌基因,在肿瘤研究领域涉及广泛,对细胞增殖、衰老、凋亡、均有调控,具体机制也在不断地完善;锌是生物体内一种特殊的微量金属元素,是多种酶类激活剂,参与形成蛋白质的锌指结构,也能以游离的形式,在细胞信号转导中起到重要的调控作用。为探究iASPP在肿瘤细胞中的未知功能与机制,我们尝试多种应激条件去刺激肿瘤细胞。首先,蛋白质免疫印迹实验发现氯化锌处理可以诱导多种细胞中iASPP蛋白的缓慢迁移
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iASPP作为癌基因,在肿瘤研究领域涉及广泛,对细胞增殖、衰老、凋亡、均有调控,具体机制也在不断地完善;锌是生物体内一种特殊的微量金属元素,是多种酶类激活剂,参与形成蛋白质的锌指结构,也能以游离的形式,在细胞信号转导中起到重要的调控作用。为探究iASPP在肿瘤细胞中的未知功能与机制,我们尝试多种应激条件去刺激肿瘤细胞。首先,蛋白质免疫印迹实验发现氯化锌处理可以诱导多种细胞中iASPP蛋白的缓慢迁移,并且这种上移存在着锌离子浓度和时间梯度的依赖性。于是,针对上移现象,展开研究。多种药物处理,只有PKC抑制剂Staurosporine可以有效地抑制iASPP的缓慢迁移,通过去磷酸化处理和蛋白质免疫共沉淀实验,进一步证明iASPP的上移实质是iASPP与活化的PKC结合,发生磷酸化修饰,分子量变大。通过si-RNA,逐个下调PKC的九个亚型,发现PKCζ起到主要抑制上移的作用。外源转染不同分段iASPP截短质粒,锁定92-294区段发生磷酸化,并排除53、187、316、320位氨基酸。接着,核质分离实验结果表明,iASPP在氯化锌处理后存在少部分核转位现象,但更多的仍然在细胞质中发挥功能。氯化锌处理一定程度上可以改变细胞的形态,抑制细胞粘附;同时,流式细胞仪检测细胞内活性氧水平,发现iASPP可以抑制锌离子诱导的ROS升高。综上所述,锌离子处理T24细胞,可以激活蛋白激酶PKCζ,进而促进下游iASPP的磷酸化,并对肿瘤细胞的粘附能力与抗氧化能力有一定的作用。
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