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目的本实验通过研究体外培养兔脂肪干细胞（Adipose Derived Stem Cells，ADSCs）与可吸收明胶海绵复合，观测其生物学行为的改变，探讨其与明胶海绵的生物相容性，为将可吸收明胶海绵作为ADSCs的有效载体进行体内移植提供实验依据。方法1.兔脂肪干细胞的原代培养及扩增取7d龄小兔颈背部及腹股沟处脂肪，Ⅰ型胶原酶消化后，采用贴壁培养法进行体外培养、扩增，并经过2-3次传代对细胞进行纯化。2.兔脂肪干细胞的鉴定取长势良好的第三代ADSCs，采用成骨、成脂、成软骨三向诱导分化及流式细胞仪检测ADSCs表面抗原标记物对其进行鉴定。3.诱导后脂肪干细胞与可吸收明胶海绵的生物相容性检测利用细胞计数方法观察原代、第5代、第10代脂肪干细胞生长情况，绘制细胞生长曲线。而后取长势良好的第三代ADSCs加入成骨诱导液，进行成骨诱导培养2-3W。采用多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine, PLL）对可吸收明胶海绵进行包埋预处理，将诱导后的ADSCs接种于预处理后的可吸收明胶海绵。采用MTT法观察诱导后ADSCs在可吸收明胶海绵上的细胞活力，利用倒置相差显微镜及扫描电镜进行观察、照相，观察诱导后ADSCs在可吸收明胶海绵上的形态及其粘附、生长、扩增等细胞学行为。结果1.原代脂肪干细胞的获取与培养倒置相差显微镜观察见原代ADSCs成圆形。培养24h开始贴壁生长，逐渐伸出伪足粘附于培养瓶底可见细胞成圆形、椭圆形。培养48h后见大量细胞贴壁生长，细胞呈短梭形，细胞呈集落样生长。原代细胞培养7-9d可见细胞铺满瓶底90%，见细胞呈现梭形、多角形、椭圆形等多种形态。原代细胞见大量红细胞、脂肪细胞，通过2-3次传代、换液，细胞逐渐纯化，形态趋向统一。2.兔脂肪干细胞的鉴定采用流式细胞仪检测细胞表面标记物，与干细胞相关的抗原CD29、CD44均高表达，而与造血细胞相关的CD33、CD34均低表达。取长势良好的第三代脂肪干细胞分别加入成骨诱导液培养5d后可见细胞逐渐短缩呈多角形，培养3W后见细胞呈多层生长，经茜素红染色可见红色钙结节；加入成脂诱导液2W后，油红O染色可见细胞内存在大小不等的红色脂滴。加入成软骨诱导液后2W，甲苯胺蓝染色见诱导后脂肪干细胞被染成蓝色。3.诱导后兔脂肪干细胞与预处理可吸收明胶海绵的生物相容性通过绘制原代、第5代、第10代脂肪干细胞的生长曲线，提示10代以内脂肪干细胞的增殖没有显著性差异。通过骨肉瘤细胞增殖情况进行对比，显示10代以内的脂肪干细胞无明显致瘤性。将诱导后的脂肪干细胞与可吸收明胶海绵复合培养，复合培养24h见细胞平均细胞粘附率达90%，MTT检测显示可吸收明胶海绵对脂肪干细胞的生长活力无明显影响，其具有良好的生物相容性。扫描电镜观察见复合生长48h细胞伸出伪足粘附于明胶海绵表面，7d见大量细胞粘附于可吸收明胶海绵表面，细胞呈长梭形，可见细胞沿支架生长，并可见细胞分泌大量细胞基质。结论诱导后脂肪干细胞可以在可吸收明胶海绵表面较好生长粘附、扩增及分化，与可吸收明胶海绵具有良好的生物相容性，可吸收明胶海绵为一种良好的脂肪干细胞载体。