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目的:探讨Kisspeptin参与调控子宫内膜蜕膜化及其在流产发病中的作用及潜在机制。方法:1、选取2018年3月-2018年10月至苏州大学附属第二医院就诊的21例稽留流产患者及13例稽留流产后非孕女性,24例正常早孕女性及15例正常非孕女性,使用酶联免疫吸附测定试验分别检测其血清中Kisspeptin水平表达。2、细胞实验:(1)体外培养子宫内膜基质细胞,诱导蜕膜化,观察随时间变化蜕膜化改变,光镜及HE染色观察细胞形态学变化及蜕膜化分子标志物的表达。(2)细胞分组:Kiss-1 siRNA 组;不同浓度 Kisspeptin 干预组;Kiss-1 siRNA+外源 Kisspeptin组;不干预组。诱导子宫内膜基质细胞蜕膜化,24h、48h、72h、96h、120h后,进行胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)、催乳素(PRL)的免疫荧光染色检测及IGFBP-1、PRL 和孕酮的 Westem-blot 检测以及孕酮限速酶(StAR、P450scc)的 RT-qPCR检测。结果:1、血清Kisspeptin在非妊娠期患者中水平极低,但在妊娠妇女中水平显著升高(P<0.0001),稽留流产患者血清Kisspeptin较正常妊娠患者明显降低(P<0.0001),但在非孕时期两者无明显差异(P>0.05)。2、光镜下观察及HE染色发现,蜕膜化24至96h,子宫内膜基质细胞表面积逐渐增大(P<0.0001),细胞圆度增加(P<0.001)。蜕膜化标志物IGFBP-1及PRL逐渐升高。3、免疫荧光可见IGFBP-1及PRL主要定位于细胞核及细胞质且在细胞中表达趋势一致,siRNA抑制Kiss-1表达后导致蜕膜化标志物表达较正常蜕膜化细胞均下调(P<0.0001)。分别加入 250nM、500nM、1μM Kisspeptin 即 Kiss-1 过表达后可见蜕膜化标志物表达较正常蜕膜化细胞更强(P<0.0001),但不同浓度之间无明显差异(P>0.05)。Western Blot检测发现随着蜕膜化时间进展,IGFBP-1及PRL表达均逐渐升高(P<0.0001),抑制Kisspeptin后IGFBP-1表达较正常蜕膜化细胞下调(P<0.01)外源性添加1μM Kisspeptin后IGFBP-1升高,与正常蜕膜化细胞表达相似(P>0.05)。单独加入不同浓度Kisspeptin可见IGFBP-1表达较正常蜕膜化细胞升高(P<0.001),但Kisspeptin浓度对IGFBP-1表达未见明显差异(P>0.05)。4、RT-qPCR检测结果显示在子宫内膜基质细胞中,予蜕膜化处理后孕酮限速酶(StAR、P450scc)表达均有升高。抑制Kiss-1基因会显著提高孕酮限速酶表达(P<0.0001),外源性添加Kisspeptin后StAR表达较前升高(P<0.0001),而P450scc表达较前下降(P<0.05)。添加 Kisspeptin 使 StAR 表达(P<0.01)及 P450scc(P<0.05)表达较正常蜕膜化细胞降低,不同Kisspeptin浓度对孕酮限速酶的表达均未见明显影响(P>0.05)。Western Blot检测发现孕酮浓度随蜕膜化进程而升高(P<0.0001),抑制Kisspeptin后孕酮表达较外源性添加Kisspeptin降低(P<0.05),孕酮表达随Kisspeptin浓度升高而升高(P<0.001)。结论:1、稽留流产患者血清Kisspeptin表达下降,提示Kisspeptin有望成为评估妊娠结局的一个新兴生物学标志物。2、Kisspeptin促进子宫蜕膜化进展,Kisspeptin可调控子宫蜕膜化,Kisspeptin与孕酮之间可能存在协同代偿机制,需要进一步研究验证。