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食道癌是全世界最恶性肿瘤之一,是世界上第六大癌症相关死亡原因,在中国居第三位。食管癌主要包括食管腺癌和食管鳞癌两种主要亚型。我国是食管癌的高发国家,其主要病理类型为食管鳞癌,约占所有食管癌的90%。随着近年来医学的迅速发展,针对食管癌的手术治疗、化疗、放疗等技术取得了一定进展,但由于食管癌病程进展快、转移范围广,其5年生存率仍处于较低水平。三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATPasefamily AAA domaincontaining 2,ATAD2),也被称为AAA+核协同调节癌相关蛋白(AAA+nuclear co-regulatory cancer-related protein,ANCCA)或PRO2000,是AAA+蛋白家族的成员之一。ATAD2蛋白包含一个溴域和一个ATP酶域。ATAD2的编码基因位于染色体8q24.13,这是一个在癌症中经常被放大的区域。与此一致的是,ATAD2被发现在多种癌症类型中显著过表达,如乳腺癌、肺癌、前列腺癌和肝癌等。相关研究表明,ATAD2作为辅助调节因子,参与包括C-MYC、RB-E2F、EZH2等多个基因介导的转录调控,从而调节多种细胞活动,在肿瘤发生中发挥重要作用。目的探究ATAD2在食管鳞状上皮细胞癌组织中的表达情况,通过结合患者临床病理资料,统计分析ATAD2表达水平与临床病理学特征之间的关联。初步探究ATAD2对ESCC细胞生物学功能的影响,为食管鳞癌的早期诊断和治疗提供新的思路,也为进一步探究ATAD2在食管鳞癌中的作用机制提供实验基础。方法1.免疫组织化学方法检测食管鳞癌患者组织中ATAD2的定位及表达情况通过免疫组织化学方法检测120例食管标本中ATAD2蛋白的表达水平,其中包括60例食管鳞癌组织、30例食管癌旁组织和30例食管不典型增生组织。2.分析ESCC组织中ATAD2的表达情况与患者病理特征的关联结合患者的临床病理资料,统计标本中ATAD2表达水平与患者的临床病理学特征的关联性,为探究ATAD2的表达与食管鳞癌的发生发展的关系提供基础。3.初步探究ATAD2的表达对ESCC细胞生物学功能的影响(1)利用针对ATAD2基因构建的小干扰RNA(siRNA)抑制ESCC细胞系中ATAD2的表达,为防止脱靶效应的出现,构建两个siRNA并转染ESCC细胞,其转染效果通过Western Blot判定。(2)CCK-8检测细胞增殖能力统计分析敲低ATAD2基因表达后ESCC细胞系的增殖能力的变化,评估敲低ATAD2对食管癌细胞增殖能力的影响。(3)Transwell实验检测ESCC细胞迁移和侵袭能力统计分析ATAD2基因表达受到抑制后ESCC细胞迁移和侵袭能力的变化,评估敲低ATAD2对食管癌细胞迁移和侵袭能力的影响。(4)凋亡实验及流式细胞术siRNA转染ESCC细胞系后,通过流式细胞术检测转染前后凋亡细胞数量变化,评估抑制ATAD2表达对食管鳞癌细胞凋亡能力的影响。结果1.ATAD2在ESCC患者组织中的表达水平显著高于癌旁组织和非典型增生食管组织(P<0.05),且ATAD2在癌旁组织、非典型增生食管组织和食管鳞癌组织中的表达率呈逐渐递增的趋势(P<0.05),ATAD2的高表达与ESCC的分化程度和远处淋巴结转移状态相关(P<0.05)。2.在ESCC细胞系EC109和KYSE30细胞中敲减ATAD2的表达后,显著抑制了 ESCC细胞的增殖能力(P<0.05),同时其迁移和侵袭能力也显著下降(P<0.05),此外,ATAD2表达受到抑制后,促进了 ESCC细胞的凋亡(P<0.05)。结论1.ATAD2在食管鳞癌组织中表达升高,并与食管鳞癌的分化程度和淋巴结转移具有明显相关性。2.抑制ATAD2蛋白的表达后,ESCC细胞的增殖能力下降,迁移和侵袭能力减弱,并促进ESCC细胞的凋亡,为食管鳞癌的治疗提供新的思路。