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目的:虫草素已被证实具有多种药理作用和生物活性,如抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗真菌、抗病毒和肝、肾脏保护等。在前期的研究中,我们发现,虫草素可显著抑制完全弗氏佐剂（CFA）诱导的小鼠脾脏和胸腺的肿大。此外,虫草素还抑制了CFA诱导的小鼠炎症脚掌中T细胞的浸润。这些都说明了虫草素参与T细胞活性的调节。然而,虫草素对T细胞活性影响的分子机制并不明晰。本研究以人CD4+T淋巴细胞白血病细胞系（Jurkat）细胞作为体外T细胞研究的模型细胞,并给予相应浓度的虫草素预处理和诱导物刺激,观察虫草素对Jurkat T细胞活性的影响并探究影响的分子机制。方法:1.Jurkat T细胞增殖、凋亡及细胞因子分泌的检测将实验分为四个组:正常对照组（Mock）,CD3/CD28抗体处理组,CD3/CD28抗体+虫草素（50μg/m L）处理组,CD3/CD28抗体+虫草素（100μg/m L）处理组。然后将生长状态良好的Jurkat T细胞按分组顺序和实验需求铺板,并培养24 h。24 h后,按分组要求分别施以相应终浓度的虫草素溶液预处理1 h,再分别加入抗人CD3单克隆抗体（anti-CD3）、抗人CD28单克隆抗体（anti-CD28）和辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠Ig G（HRP*Goat Anti-Mouse Ig G（H+L））孵育24 h,建立体外T细胞研究模型。CCK-8法检测各组Jurkat T细胞的增殖情况;流式细胞术（Flow cytometry）检测各组Jurkat T细胞的凋亡情况;酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测各组Jurkat T细胞培养上清液中细胞因子白细胞介素-2（Interleukin-2,IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）和γ-干扰素（Interferon-γ,IFN-γ）的分泌情况。2.Jurkat T细胞中ZAP70磷酸化和Erk磷酸化的检测将实验分为六个组:正常对照组（Mock）,虫草素（50μg/m L）处理组,虫草素（100μg/m L）处理组,anti-CD3处理组,anti-CD3+虫草素（50μg/m L）处理组,anti-CD3+虫草素（100μg/m L）处理组。将生长状态良好的Jurkat T细胞按分组顺序和实验需求铺板,并培养24 h。24 h后,按分组要求分别施以相应终浓度的虫草素溶液预处理1 h,再以anti-CD3刺激30 min,建立体外T细胞研究模型。随后收集各组细胞,并制备蛋白样品。采用蛋白免疫印迹（Western blot）法分别检测各组样品中ZAP70、Erk磷酸化水平以及ZAP70、Erk蛋白的表达情况。3.Jurkat T细胞中活化T细胞核因子-1（NFAT1）核易位的检测将实验分为四个组:正常对照组（Mock）,虫草素（50μg/m L）处理组,anti-CD3处理组,anti-CD3+虫草素（50μg/m L）处理组。将生长状态良好的、可表达活化T细胞因子-1-荧光探针（NFAT1-m Cherry）融合蛋白的Jurkat T细胞按分组顺序和实验需求铺板,并培养24 h。24 h后,按分组要求分别施以相应终浓度的虫草素溶液预处理1 h,再以anti-CD3分别刺激15 min、30min、2 h和6 h,建立体外T细胞研究模型。然后将各组细胞固定、染色,并转入六孔小孔玻底板中。将玻底板置于徕卡SP8共聚焦显微镜下观察,并使用徕卡LAS AF软件获取图像并分析。结果:（1）CCK-8法检测发现,与Mock组相比,单纯由CD3/CD28抗体刺激的Jurkat T细胞增殖活性显著提高（P＜0.01）;经虫草素预处理的Jurkat T细胞与单纯刺激的相比,增殖活性显著下降（P＜0.01）,且随着虫草素剂量的加大,下降更为明显（P＜0.01）。以上说明,虫草素能显著抑制CD3/CD28抗体刺激的Jurkat T细胞增殖,且呈剂量依赖性。（2）Flow cytometry检测发现,与Mock组相比,单纯由CD3/CD28抗体刺激的Jurkat T细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）;而经虫草素（100μg/m L）预处理的Jurkat T细胞与单纯刺激的相比,凋亡率显著上升（P＜0.05）。以上说明,虫草素能显著促进CD3/CD28抗体刺激的Jurkat T细胞凋亡。（3）ELISA法检测发现,在单纯CD3/CD28抗体刺激下,Jurkat T细胞分泌IL-2、IL-6和IFN-γ的能力均显著增强（P＜0.01）;而经虫草素（分别为100μg/m L和50μg/m L）预处理的Jurkat T细胞与单纯刺激的相比,分泌IL-2和IL-6的水平显著下降（P＜0.05）。以上说明,虫草素能抑制Jurkat T细胞中IL-2和IL-6的分泌。虫草素对IFN-γ的分泌无明显影响（P＞0.05）。（4）蛋白免疫印迹（Western bolt）法检测发现,单纯经虫草素处理后,未检测到ZAP70蛋白的磷酸化;经anti-CD3刺激后,Jurkat T细胞中ZAP70磷酸化水平明显升高,且经虫草素预处理的Jurkat T细胞与未经预处理的相比,ZAP70磷酸化水平下降,且呈虫草素剂量依赖性;此外,虫草素还上调了ZAP70表达。以上说明,虫草素能剂量依赖性地抑制Jurkat T细胞中ZAP70磷酸化。在未经anti-CD3刺激下,Jurkat T细胞中Erk磷酸化信号较弱,且虫草素（100μg/m L）轻微减弱了此信号;经anti-CD3刺激后,Jurkat T细胞中Erk磷酸化水平升高,且经虫草素预处理的Jurkat T细胞与未经虫草素预处理的相比,Erk磷酸化水平降低。以上说明,虫草素能够降低Jurkat T细胞中Erk磷酸化水平。（5）荧光成像检测发现,单纯的虫草素处理,未诱导Jurkat T细胞中转录因子NFAT1发生核易位,反而轻微地抑制了NFAT1核易位;经anti-CD3刺激后,NFAT1的核积聚量显著增加,且在30 min时达到峰值,之后逐渐下降至正常水平;与anti-CD3刺激组（15 min、30 min、2 h）相比,anti-CD3+Cordycepin组中发生NFAT1核易位的细胞占比明显下降（P＜0.05）;以上说明,虫草素能够抑制Jurkat T细胞中转录因子NFAT1核易位。结论:（1）虫草素能够抑制Jurkat T细胞增殖和促进Jurkat T细胞凋亡。（2）虫草素能够抑制Jurkat T细胞中IL-2和IL-6的分泌,但对IFN-γ的表达无明显影响。（3）虫草素能够抑制TCR信号级联上游信号分子ZAP70磷酸化以及下游MAPK/Erk信号通路中Erk磷酸化。（4）虫草素能够抑制TCR信号级联中转录因子NFAT1核易位。综上所述,虫草素可能通过抑制TCR信号级联中的ZAP70磷酸化、MAPK/Erk信号通路以及NFAT信号通路,从而调节T细胞活性。