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背景糖尿病足（diabetic foot,DF）是基于糖尿病（diabetes mellitus,DM）患者外周神经和微血管损伤引发的下肢皮肤病变,可以由创伤诱发。糖尿病发病率高,所有糖尿病患者一生中至少有约四分之一的几率发病。由于糖尿病患者皮肤微循环障碍和过度角化,常导致创面慢性迁延化,成为难愈性溃疡。不但造成长期的治疗费用过高,普通清创、负压吸引等常规的外科与内科综合治疗预后不佳,尤其是Wagner III级以上的重度糖尿病足患者,截肢率在20%～40%之间,目前是医院截肢患者的主要构成。本课题组的胫骨横向骨搬移（tibial transverse transport,TTT）技术是基于Ilizarov张力应力法则开展的临床治疗技术,发现骨牵张对骨组织及其周围生物组织如神经、肌肉组织等都有促进再生作用,且显著改善患处微循环和供血,已经开始应用于重度糖尿病足的临床治疗。在临床研究中发现创面愈合率高,且皮肤结构完整,基底层细胞增殖,提示为再生愈合。进一步发现TTT治疗后,机体外周血干细胞的动员效应。因此,本研究在此基础上,主要关注TTT皮肤干细胞的活化与分布情况,以此探讨皮肤干细胞活化参与TTT促进重度糖尿病足溃疡再生愈合的机制。目的本研究在观察TTT促进糖尿病足创面愈合情况的基础上,重点关注手术前后创面皮肤干细胞的活化和Wnt信号通路相关蛋白的表达与分布情况,以此探讨皮肤干细胞活化参与TTT促进重度糖尿病足溃疡再生愈合的机制。方法选取2014年6月至2018年1月接受TTT治疗的重度糖尿病足患者共126例,患者收治于广西医科大学第一附属医院骨关节外科。首先对患者基本信息包括性别、Wagner分级、Texas分级、年龄、病程等进行统计。随访观察记录患者创面肉眼观、创面愈合情况,对愈合率、截肢率进行统计。随机选取患者进行术前术后临床指标测评并统计结果,测评指标包括TCSS评分、足背动脉搏动检测、皮温情况、10g尼龙丝测试、VAS评分,对患者的下肢神经、血流恢复情况进行评判。其次取患者治疗前和治疗后1月的创面边缘组织进行固定制作成切片,进行HE染色,观察创面组织的形态学变化,应用免疫组织化学染色技术对患者创面边缘组织中的CK19、CK15、LGR5等进行定位检测,以此标记皮肤干细胞,检测皮肤干细胞活化程度。结果（1）临床基本情况统计:纳入研究的患者共126例,年龄61.66±9.16岁,男94例,女32例,其中Wagner分级Ⅲ级67人、Ⅳ级57人、Ⅴ级2人,糖尿病病程8.39±6.67年,糖尿病足病程107.63±282.63天。（2）临床疗效:1例Wagner5级患者截肢,在TTT术后2-9个月内,除截肢患者外,其他患者创面溃疡创面均愈合,保肢率99%,皮肤完全覆盖创面,仅留线性疤痕;患者患肢疼痛基本得到缓解甚至疼痛消失,麻木感症状也逐渐改善,出现有放点样的感觉。（3）临床指标:患者术后的TCSS评分结果整体小于术前（P＜0.05,n=15）;治疗后患者双足的足背动脉搏动情况均有所改善,治疗后患者的足部皮温普遍升高（P＜0.05,n=15）;术后10g尼龙丝测定值大于术前（P＜0.05,n=15）;术后的VAS评分结果小于术前（P＜0.05,n=15）。结果显示,骨搬移不仅可以使患者创面愈合,还可以改善患者下肢血流、神经病变情况。（4）TTT术前后皮肤形态学结构HE染色观察:术前表皮结构紊乱,表皮层变薄,棘细胞数量减少且空泡化,真皮乳头萎缩,真皮及皮下血管,堵塞、减少、管壁增厚,大量炎性细胞浸润;术后染色结果可见完整皮肤结构,皮肤全层炎性细胞浸润相较于术前明显减少,表皮层结构完整,真皮层可见大量新生血管、胶原纤维,皮下可见大量腺体,偶见毛囊组织。（5）TTT术前后皮肤干细胞免疫组织化学染色情况:术前CK19在表皮层、真皮层及皮下组织都呈现阳性率低的表现,术后CK19在表皮基底上层,呈片状分布,腺管样结构中呈现团状聚集性表达。术后CK19阳性染色面积比为（9.349±2.715）%,术前CK19阳性染色面积比为（1.658±0.765）%,两者经t检验比较t=10.559,P＜0.05,n=15。术前LGR5在表皮层、真皮层及皮下组织偶见几处散在阳性表达。术后LGR5阳性在真皮层中的腺管样结构及毛囊中,呈团状聚集性表达,表皮层未见阳性表达。术后LGR5阳性染色面积比为（6.710±2.057）%,术前LGR5阳性染色面积比为（1.318±0.594）%,两者经t检验比较t=9.754,P＜0.05,n=15。术前未见CK15阳性染色。治疗后CK15定位于细胞质,主要表达在表皮基底层细胞,真皮中的毛囊中可见呈现团状聚集性表达,颜色深染。组织中整合素β、整合素α6表达水平在术前和术后无显著差别。术前CD34阳性染色偶见于真皮层,颜色浅且不连续。术后CD34阳性染色定位于血管内皮细胞,主要表达在真皮层小动脉和小静脉,数量众多,颜色深染呈线性连续环状。术前未见ki67阳性染色。术后ki67阳性染色定位于细胞核,主要表达在表皮的基底层,沿基底层呈基本连续分布。术前F4/80在表皮层、真皮层均有表达,呈片状分布。术后F4/80阳性染色定位于细胞质,表皮层可见弱阳性表现。术前未见Wnt7a表达。术后Wnt7a定位于细胞核,主要于表皮层表达,呈散在性分布,真皮层的血管中也有阳性表达。术前未见Wnt10a表达。治疗后Wnt10a阳性染色定位于细胞质,表皮层、真皮层均有表达。术前β-连环蛋白表达呈弱阳性,散在分布于真皮血管。术后β-连环蛋白定位于细胞膜,于表皮层大量表达,呈环状分布,真皮层血管及腺体中少量表达,颜色深染。术前组织中BMP2定位于细胞核,大量散在分布。术后组织中未见BMP2表达。结论1.TTT术可显著促进DF溃疡创面愈合。2.TTT术可能通过Wnt等信号通路激活组织皮肤干细胞,促进创面再生愈合。