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目的:积雪草苷(Asiaticoside,AS)是积雪草中提取出的一种白色三萜皂苷类针状结晶,前期研究发现积雪草苷具有改善阿尔茨海默病大鼠记忆力,明显抑制LPS所致急性肺损伤大鼠血浆IL-6,COX-2等炎症因子等作用,本研究拟进一步探索积雪草苷对Aβ1-42致内皮细胞损伤是否具有有保护效应,其保护效应是否与抑制内皮细胞凋亡,调节Bcl-2/Bax比例,抑制IL-6,IL-1,TNF-α等炎症因子表达有关,旨在为积雪草苷用于阿尔茨海默病的防治提供科学的实验依据。方法:(1)Aβ1-42致内皮细胞损伤浓度与时间的确定:Aβ1-42分为5×10-4、5×10-3、5×10-2、5×10-1、5、5×101、5×102μmol.L-17个浓度,将Aβ1-42加入HUVEC细胞后分别培养0.5、2、6、12、24、48h,采用CCK-8法检测细胞增殖活力;(2)积雪草苷浓度的选择:积雪草苷分为10-2,10-3 10-4,10-5,10-6 10-7,10-8 mol.ml-17个浓度组,将积雪草苷加入HUVEC细胞后培养,采用CCK-8法检测细胞活力;(3)积雪草苷对Aβ1-42刺激后HUVEC细胞活力影响:CCK-8法检测积雪草苷10-5,10-6,10-7,10-8mol.ml-1对Aβ1-42刺激后HUVEC细胞增殖情况;(4)积雪草苷对Aβ1-42刺激HUVEC后细胞凋亡影响:积雪草苷分为10-5,10-6,10-7,10-8 mol.ml-14 个浓度,Hochest33342/PI双染后荧光显微镜检测Aβ1-42刺激后HUVEC细胞凋亡;AnnexinV-FITC流式细胞仪检测HUVEC细胞凋亡;免疫印迹法检测Aβ1-42刺激后HUVEC细胞Bcl-2/BAX蛋白表达;(5)积雪草苷对Aβ1-42刺激后HUVEC细胞炎症因子IL-1,IL-6和TNF-α影响:ELISA法检测积雪草苷对Aβ1-42刺激HUVEC细胞后上清液IL-1,IL-6和TNF-α含量影响。结果:(1)Aβ1-42处理0.5h与2h对HUVEC细胞活性没有明显影响,与阴性组比较无统计学差异(P>0.05);5 ×102μmol·L-1Aβ1-42在处理6h,12h,24h,48h后抑制HUVEC细胞活性,同阴性组比较有统计学意义(P<0.05),其中48h同阴性对照组比较有显著意义(P<0.01);5×10μmol·L-1Aβ1-42在处理24h,48h后抑制HUVEC细胞活性,5 μmol·L-1Aβ1-42处理48h抑制HUVEC细胞活性,同阴性对照组比较有统计学意义(P<0.05)。5×10-4、5×10-3、5×10-2、5×10-1μmol·L-1Aβ1-42在各时间段对HUVEC细胞活性无明显影响(P>0.05)。(2)积雪草苷10-2,10-3 mol.ml-1对细胞生长有一定抑制作用,比较有统计学意义(P<0.01);积雪草苷10-4 10-5,10-6,10-7,10-8mol.ml-1对细胞生长无抑制作用,比较无统计学差异(P>0.05)。因此综合文献和实验结果,本实验选用10-5,10-6 10-7,1 0-8mol.ml-1四个浓度组进行干预。(3)积雪草苷10-5,10-6,10-7,10-8 ml.ml-14个浓度组可以明显增加β淀粉样蛋白损伤后血管内皮细胞的存活率,减轻β淀粉样蛋白致血管内皮细胞损伤,具有较好的保护效应。(4)积雪草苷干预后HUVEC凋亡细胞和死亡细胞、凋亡细胞和死亡细胞率明显少于Aβ1-42模型组,但仍可见部分呈凋亡特征性改变,细胞核呈亮蓝色染色,可见死亡细胞(红色),呈现较好的剂量依赖性。积雪草苷减少BAX蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达,增加Bcl-2/BAX比值,积雪草苷10-5,10-6,10-7mol.ml-1组与模型组比较有统计学差异(P<0.05),积雪草苷10-8mol.ml-1组Bcl-2/BAX比值与模型组比较无统计学差异(P>0.05)。(5)积雪草苷呈剂量依赖性的抑制β淀粉样蛋白致HUVEC细胞的IL-1,IL-6与TNF-α表达,与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)积雪草苷对β淀粉样蛋白致HUVEC损伤有较好的保护效应。(2)积雪草苷可以减轻β淀粉样蛋白致HUVEC细胞凋亡,增加Bcl-2/BAX比值,呈现较好的剂量依赖性。(3)积雪草苷可以减少β淀粉样蛋白致HUVEC细胞炎症因子IL-1,IL-6与TNF-α的释放,呈剂量依赖性。(4)积雪草苷对β淀粉样蛋白致HUVEC损伤保护效应的机制可能与抑制细胞凋亡和抑制炎症因子IL-1,IL-6与TNF-α的释放有关。