【摘 要】
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研究目的:HER-2（Human Epidermal Growth Factor Receptor 2）是受体酪氨酸激酶（RTK）超家族的重要成员,据报道其可作为肿瘤进展的诊断或预后标志物。HER-2阳性乳腺癌预示着高转移性,高复发率。HER-2抑制剂是治疗HER-2乳腺癌的重要方法。目前常用的HER-2抑制剂都面临着耐药性以及毒性等问题。我们通过对潜在的HER-2抑制剂Q7j即（E）-4-甲基-
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研究目的:HER-2（Human Epidermal Growth Factor Receptor 2）是受体酪氨酸激酶（RTK）超家族的重要成员,据报道其可作为肿瘤进展的诊断或预后标志物。HER-2阳性乳腺癌预示着高转移性,高复发率。HER-2抑制剂是治疗HER-2乳腺癌的重要方法。目前常用的HER-2抑制剂都面临着耐药性以及毒性等问题。我们通过对潜在的HER-2抑制剂Q7j即（E）-4-甲基-N-（（2-（4-（三氟甲基）苯乙烯基）恶唑烷-4-基）甲基）苯胺的作用机制做进一步研究,期待能为临床用药以及抑制剂的结构优化提供参考与借鉴。研究方法:a采用MTT法检测化合物Q7j和Mubritinib对SKBR3,MCF7,MCF-10A等细胞系增殖的影响;进行激酶实验以及分子对接探究化合物Q7j的作用靶点;b流式细胞术探究化合物Q7j对细胞凋亡的影响;c采用Transwell和划痕实验检测化合物对乳腺癌细胞迁移能力的影响;d western blot分析评价化合物Q7j对EMT（Epithelial-mesenchymal transition）信号通路相关蛋白的表达以及凋亡相关蛋白的影响;e采用细胞免疫荧光染色实验检测EMT过程核心蛋白的表达情况以及定位情况;f运用转染技术通过敲低parp1基因的蛋白表达水平,探究parp1潜在的调控关系;g采用RT-PCR技术进一步佐证parp1的调控机制;h建立裸鼠异种移植瘤模型检测化合物在体内对HER-2阳性乳腺癌的抑制作用;i采用免疫组织化学染色实验检测移植瘤组织中Ki67,Cleaved-caspase 3的表达情况。研究结果:MTT实验结果证明,化合物Q7j对HER-2阳性细胞系具有良好的抗增殖活性,能显著抑制HER-2阳性乳腺癌细胞系SKBR3的增殖;激酶实验发现化合物Q7j对HER-2激酶有良好的抑制作用,MOE分子对接证实化合物Q7j能够和HER-2蛋白较好的结合;流式细胞术显示化合物Q7j能显著促进肿瘤细胞的凋亡;结合Transwell和划痕实验发现化合物Q7j在较低浓度下也能抑制SKBR3细胞的迁移能力并且在同等浓度下抑制作用优于木利替尼;Western blot实验结果表明Q7j不仅能够抑制凋亡过程相关的促癌基因（Bcl-2,parp1）的表达,并通过抑制N-cadherin、Vimentin、Snail、β-catenin的表达,促进上皮特征基因E-cadherin的表达进而影响EMT进程;免疫荧光结果也进一步证明这一作用;通过对肿瘤细胞的转染敲低parp1发现,parp1能够影响EMT有关蛋白的表达;通过裸鼠荷瘤实验发现,化合物Q7j通过影响Cleaved-caspase 3蛋白的表达促进肿瘤细胞凋亡进而抑制肿瘤的增殖和发展。结论:1化合物Q7j是潜在的HER-2抑制剂,能够有效抑制SKBR3细胞的增殖;2化合物Q7j能够在体外促进肿瘤细胞的凋亡;3化合物Q7j通过抑制EMT进程进而影响细胞的迁移能力;4化合物Q7j可能通过HER-2/parp1通路影响肿瘤细胞的EMT进程进而抑制肿瘤的发展。
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