湖北省烟草青枯病的病原学研究

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烟草青枯病是由茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的典型的细菌性土传病害,在我国烟草种植区普遍发生,其中以福建、广西、贵州、云南、四川、湖南发生最为严重,造成极大的经济损失。近年来,随着湖北烟草产业的不断发展,烟草青枯病的危害也日益加重,严重影响了该地区烟草的产量和品质。本文从该病的病原学出发,在病原鉴定的基础上,研究测定了烟草青枯病菌的生化型、生理小种、致病型、演化型及序列变种,并初步明确了该病在田间的发病动态,为湖北烟草青枯病防治和烟草抗青枯病品种的选育提供了理论基础。研究结果如下:2013年和2014年从湖北省恩施和十堰烟区采集烟草青枯病典型病株,在TTC选择性培养基上分离纯化获得54个烟草青枯菌。采用细菌16S r RNA基因序列分析和青枯菌种的特异性引物PCR鉴定,将烟草青枯病的病原鉴定为R.solanacearum。测试了54个菌株对碳水化合物(乳糖、麦芽糖、纤维二糖、甘露醇、山梨醇和甜醇)的氧化利用能力,将所有供试菌株划分为生化型Ⅲ;根据菌株对6种鉴别寄主(烟草、马铃薯、番茄、茄子、辣椒和花生)的抗感反应,将供试菌株鉴定为生理小种1号。从54个菌株中选取23个菌株进行了致病力测定,依据它们在3个烟草品种上的反应进行聚类分析,将其划分了3个致病型:Ⅰ型菌株致病力较弱,平均病情指数为34.59,占供试菌株的21.74%;Ⅱ型菌株致病力中等,平均病情指数为59.02,占供试菌株的39.13%;Ⅲ型菌株致病力强,平均病情指数为81.33,占供试菌株的39.13%。通过演化型多重PCR(Pmx-PCR)对菌株的演化型进行了鉴定,54个菌株均能扩增得到片段大小分别为280 bp和144 bp的两条特异性条带,表明供试菌株均属于演化型Ⅰ(亚洲分支)。基于青枯菌egl基因和mut S基因的部分序列,将54个菌株鉴定为演化型Ⅰ的3个序列变种,即序列变种15、17和44,其中序列变种17和44为优势序列变种,且均来源于恩施烟区,而序列变种15均来源于十堰烟区。2013年和2014年对湖北省宣恩县和咸丰县的烟草青枯病发病动态的调查结果表明,烟草青枯病最早于6月上旬开始发病,病情发展缓慢;随着气温的升高和降雨量增多,7月中旬病害发展进入盛发期,8月中旬达到发病高峰直至烟叶采收结束,最终发病率在90.3%~96.1%之间,病情指数在37.3~47.1之间。
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