目的：内耳具有复杂的管液体平衡系统，包括前庭阶和鼓阶高钠离子、低钾离子浓度的外淋巴液和中阶高钾离子、低钠离子浓度的内淋巴液，内外淋巴液离子成分的差别导致两者间80mV的电位差别。前庭毛细胞和Corti器均暴露于充满内淋巴的空间里，可见内耳液体成分和渗透压的调节对维持身体平衡及听觉有重要作用。内淋巴液主要产生于血管纹，重吸收于内淋巴囊，前庭膜、Corti器及前庭暗细胞也参与内淋巴的控制，但发挥作用的程度尚不清楚。内淋巴液分泌或吸收失衡可以造成严重的病理生理结果，如膜迷路积水。梅尼埃病是以膜迷路积水为基本病理改变，以发作性眩晕、耳鸣、耳聋和耳胀满感为特征的特发性内耳疾病，其病因尚无定论，发病机制也未阐明。因梅尼埃病的膜迷路积水原因不明，故称之为特发性或原发性膜迷路积水。膜迷路积水的基本病理变化可概括为内淋巴腔膨胀扩大，内淋巴液增多以及一系列的继发改变，这一变化与内耳水代谢异常有关。水通道的概念早在1953年即被提出，1957年Pelli和Sidel等发现红细胞上有水的孔道，随后研究发现水通道介导水依照渗透压梯度向高渗方向移动。目前已在哺乳动物体内发现10种水通道蛋白（aquaporin，AQP）亚型AQP0~9 ，它们广泛分布于许多组织细胞的质膜中，功能上属于选择性水孔道的主体内在膜蛋白（major intrinsic protein,MIP）家族，能快速和选择<WP=5>性地促进水的穿膜运动而达到渗透梯度。AQP-2主要存在于肾集合管主细胞的顶质膜上，是抗利尿激素血管加压素（antidiuretic hormone vasopressin,ADH/AVP）的靶蛋白，在尿液浓缩中发挥作用。因某些药物，如氨基糖甙类抗生素和非类固醇类抗炎药物同时具有耳毒性和肾毒性，有学者推测内耳与肾脏具有解剖和结构的相似性，该两器官可能有相似的水电解质调节机制。最近研究表明膜迷路积水患者血浆ADH水平显著高于正常人，而AQP家族中仅AQP-2的激活与ADH有关，故研究AQP-2将有助于揭示维持内耳内淋巴平衡的机制，探索内淋巴液失衡的原因。本课题旨在研究AQP-2在正常大鼠内耳和膜迷路积水模型大鼠内耳的分布，通过AQP-2的表达分析它在内耳水代谢中的机制，探讨其在膜迷路积水中的作用，为梅尼埃病病理机理的阐明提供依据。（因技术、资金等方面原因膜迷路积水模型创建失败，受启发于AQP-2具有水通道蛋白参与机体水代谢的共性，我们另外研究了AQP-2在人类鼻息肉组织中的表达及鼻腔局部应用丙酸氟替卡松对鼻息肉中AQP-2表达的影响，初步探讨了它在鼻息肉形成中的作用并为类固醇激素治疗鼻息肉作用机制的阐明提供了新的方向，详见论文第二部分。但因此类研究处于起始阶段目前尚不能进行综述，特此说明。）方法：采用链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶法(SP法)免疫组织化学技术，具体步骤如下：1 组织制备本实验使用正常成年雄性SD大鼠15只（体重300-350g），动物经乌拉坦（1.5g/Kg）腹腔注射麻醉后迅<WP=6>速开胸暴露心脏，自心尖插入12号注射针头，用生理盐水、4%多聚甲醛（pH7.4）灌注，至动物颈项变硬、尾巴变直变硬、唇眼呈灰白色，快速切取双侧颞骨，暴露耳蜗，切除镫骨以显露卵圆窗，用细针在蜗顶及圆窗各造一小孔，用吸管经蜗顶孔向耳蜗灌注固定液3次，将颞骨浸入4%多聚甲醛4℃下过夜。然后将颞骨置于0.12M的EDTA（Ph4.0）液中脱钙（4℃）约4-5周，常规梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋，根据拟显示部位，按以下3种位置放置颞骨：内耳道朝下主要显示耳蜗；蜗尖朝上主要显示内淋巴管；内耳道朝侧方主要显示内淋巴囊。将石蜡包埋的颞骨按以上3个位置连续切片。2 免疫组化染色采用链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶（streptavidinperoxidase,SP）免疫组化技术检测AQP-2的表达。羊抗人AQP-2多克隆抗体购自美国SANTA CRUZ公司，根据预试验结果确定一抗浓度为1：75，SP免疫组化试剂盒购自北京中山生物技术公司，工作液浓度为1：100，石蜡切片常规脱蜡、梯度酒精脱水，3%甲醇-双氧水漂洗除去内源性过氧化物酶活性，10%正常山羊血清封闭，其他步骤按SP免疫组化试剂盒说明书进行， DAB显色，苏木精复染，脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。以相邻切片作阴性对照，对照切片中以磷酸盐缓冲液代替一抗；以正常SD大鼠肾脏切片作阳性对照。结果：所有染片背景染色清晰，阴性对照不着色，AQP-2阳性反应呈棕黄色；阳性对照片中分布于鼠肾集合管主细胞的顶质膜。在正常大鼠内耳切片中AQP-2表达于<WP=7>内淋巴囊中间部柱状上皮细胞的顶质膜及顶质膜侧的细胞浆中，而内淋巴管的扁平上皮及其向内淋巴囊移行中的扁平-立方上皮中均未见表达；在血管纹处AQP-2表达于细胞浆；在Corti氏器的支持细胞和感觉细胞以及螺旋神经节的双极神经元细胞浆中可见AQP-2表达；此外在螺旋缘的齿间细胞、前庭唇和鼓唇及螺旋凸的细胞浆、盖膜和基底膜均发现有AQP-2表达。从耳蜗顶回到底回以上各处表达未见明显强弱差异，在前庭膜及壶腹未见AQP-2分布。结论：AQP-2在大鼠的内淋巴囊、血管纹、螺旋神经节有较强染色，在Corti氏器、基底膜、螺旋缘的前庭唇和鼓唇、盖膜、螺旋凸也有染色。可见AQP-2主要分布在与内淋巴代谢有关的结构:?