褐飞虱(Nilaparvata lugens Stal)属于半翅目飞虱科,是危害水稻最重要害虫之一,通过刺吸水稻的汁液,使水稻发黄或者枯死,严重威胁着我国的粮食安全。目前我国对于褐飞虱的防治主要是以化学防治为主,但是长期、不合理的化学农药使用严重威胁着当地的生态环境,同时褐飞虱对很多常用的杀虫剂产生了不同程度的抗药性,导致防效降低。因此,寻求对褐飞虱生物防治的新途径变得更为重要。本文通过在田间搜集及筛选对褐飞虱致死的菌株,在实验室中进行分离、纯化和培养,并对其种类进行了鉴定,得到了平沙绿僵菌(Metarhizium pingshaense)NJMP2103 和球孢白僵菌(Beauveria bassiana)NJBb2101 两种对褐飞虱起致死作用的昆虫病原真菌,并就促进平沙绿僵菌分生孢子萌发的因素以及球孢白僵菌对褐飞虱的生长发育及繁殖等亚致死作用等方面进行了相关探索,为防治褐飞虱提供生物防治资源。一、褐飞虱高毒力菌株的筛选和致病力研究从田间采集的感染昆虫病原真菌而死亡的褐飞虱中,分离、纯化并培养了多个真菌菌株,通过测定真菌核糖体DNA的ITS序列,并与NCBI数据库中的序列进行比对,鉴定了平沙绿僵菌和球孢白僵菌菌株各一个,分别命名为NJMP2103和NJBb2101。平沙绿僵菌NJMP2103对褐飞虱的室内毒力测定结果表明,以1×106孢子/mL的浓度处理褐飞虱,在6天时累计校正死亡率达60.0%,说明平沙绿僵菌NJMP2103对褐飞虱具有较高的毒力。球孢白僵菌NJBb2101对褐飞虱的室内毒力测定结果表明,褐飞虱在第4天起逐渐开始死亡,到第10天时会达到最高的累计校正死亡率68.7%。两个真菌菌株的获得,为深入研究菌株致病力、筛选合适的生物防治提供了优秀的材料。二、促进绿僵菌分生孢子萌发因素的探索绿僵菌是一种重要的昆虫病原真菌,在侵染寄主昆虫时,绿僵菌的分生孢子在昆虫体表萌发率的高低及萌发速率都影响着病原真菌对昆虫致病力的强弱。本研究以实验室中筛选的平沙绿僵菌NJMP2103菌株为对象,通过实验发现绿僵菌分生孢子在昆虫翅的浸提液中的萌发率远远大于对照组(灭菌水)的萌发率。通过与不同浓度的蛋白胨溶液进行比较,发现在翅的浸提液中的萌发率显著高于各种蛋白胨溶液,因此又进一步的对绿僵菌分生孢子在不同液体中的萌发率进行探索。实验结果表明,在成分较为复杂的营养液(氨基酸、维生素、糖类)中,其绿僵菌分生孢子的萌发率及产孢量会更快更多,且在高营养物质的溶液中不易产生附着胞,而翅的浸提液处理组中的绿僵菌分生孢子萌发较快,芽管端部会膨大,较容易产生附着胞。因此更加深入的研究昆虫病原真菌分生孢子的萌发情况及附着胞的形成,对于我们了解昆虫病原真菌的侵染机制、通过外源手段提高昆虫病原真菌的产孢量及毒力,提供害虫的生物防治技术具有十分重要的意义。三、球孢白僵菌对褐飞虱生长发育及繁殖的影响目前球孢白僵菌作为微生物农药被广泛应用到田间生物防治中,但是其对褐飞虱的亚致死效应仍不清楚。本文将亚致死浓度的球孢白僵菌NJBb2101分生孢子悬浮液(5×105分生孢子/mL)接种到三龄褐飞虱若虫中,能显著降低当代若虫存活率、羽化率、雌虫比例、交配率、产卵量以及子代若虫孵化率。接下来用三种测试杀虫剂(吡虫啉,毒死蜱和醚菊酯)对亲本褐飞虱雌成虫、后代四龄若虫和后代雌成虫分别进行生物测定,发现用亚致死浓度球孢白僵菌NJBb2101处理后的褐飞虱更容易受到这三种药剂的影响,提高了对化学杀虫剂的敏感性。因·此,更为深入的研究昆虫病原真菌的亚致死作用,在田间将昆虫病原真菌与化学农药联合使用,可以达到高效控制害虫以及减少施药量的目的,并为水稻害虫褐飞虱的生物防治提供使用依据。