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目的:比较弹性蛋白(Elastin)、原纤维蛋白-1(Fibrillin-1)与胶原在腹股沟直疝及斜疝患者腹横筋膜的表达与分布,以期获得对腹股沟疝尤其直疝病理生理的进一步认识。
方法:30例腹横筋膜组织取自2008年12月至2009年10月在承德医学院附属医院行无张力疝修补术患者。其中直疝13例(男11例,女2例),斜疝17例(男13例,女4例)。患者年龄28-67岁,并排除其他系统疾病(如糖尿病,系统感染,恶性肿瘤等)及吸烟患者。腹横筋膜取材在远离疝囊的相对正常的内侧腹横筋膜处切取标本0.7-1cm2,标本切取后放入100mmol/L中性福尔马林溶液中固定备用。所用标本经100mmol/L福尔马林溶液固定24小时,修整组织块常规方法制成蜡块。蜡块连续切片后用HE染色法观察所取组织情况。分别应用鼠抗人弹性蛋白单克隆抗体及兔抗人Fibrillin-1多克隆抗体进行免疫组化,检测腹横筋膜组织中弹性蛋白及Fibrillin-1的表达与分布情况。以PBS溶液代替一抗做空白对照。切片经脱蜡后PBS冲洗,用过氧化氢阻断内源性过氧化物酶的活性,微波抗原修复冲洗后滴加50μl一抗,室温下孵育60 min。应用即用型MaxVisionTM试剂盒,按其说明书操作。应用DAB显色法。显色后采用Olympus BX51型光学显微镜观察并摄片。应用MASSON三色法对胶原进行染色。染色后用显微镜观察,摄取图像。图像采用ImagePro Plus6.0软件进行分析,每张切片随机取10个40×10倍视野,测定每个视野累计光密度(IOD)值,以10个视野的平均值来表示。采用SPSS11.5统计软件进行统计,两组间比较采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义。
结果:HE染色显示所取组织为腹横筋膜。免疫组化染色显示:直疝患者腹横筋膜弹性蛋白排列紊乱,断裂,部分区域聚集。斜疝患者腹横筋膜弹性蛋白和直疝相比排列较整齐,呈连续分布。原纤维蛋白-1在直疝和斜疝患者腹横筋膜的分布情况和弹性蛋白相似。Masson三色法显示胶原在直疝患者腹横筋膜排列较斜疝紊乱,且含量减低。
用图像分析系统测得累计光密度(IOD)值显示直疝患者腹横筋膜弹性蛋白含量(2526.76±701.74)明显低于斜疝(3035.10±648.02)患者,差异具有显著性(P＜0.05);Fibrillin-1的含量(2265.22±574.56)在直疝患者腹横筋膜明显低于斜疝(2735.10±639.73)患者,差异具有显著性(P＜0.05)。胶原含量(64466.40±19022.17)在直疝患者腹横筋膜也明显低于斜疝(82792.20±26706.08)患者,差异具有显著性(P＜0.05)。
结论:腹股沟直疝患者腹横筋膜弹性蛋白、Fibrillin-1及胶原的含量明显低于斜疝,且分布异常,导致了直疝腹横筋膜弹性及韧性较斜疝下降,影响其抗击腹内生理和病理压力的能力,可能是腹股沟直疝发病原因之一。