论文部分内容阅读
竹茹为临床常用中药之一，又是卫生部批准的“可用于保健食品的物品”，但到目前为止，未见关于其化学成分、药理活性和质量控制的有深度的研究报道。本研究对竹茹超临界提取物(代号为EZR2002)的物理性质和化学组成进行了系统分析，首次检出了竹茹中五环三萜类化合物木栓酮、羽扇豆烯酮和羽扇豆烯醇的存在，对其进行了定性和定量研究；建立了竹茹中木栓酮的气相色谱检测方法，为原料的甄别和质量控制提供了依据；并运用硅胶柱层析和高速逆流色谱法对EZR2002中主要的三萜类化合物进行了单体的制备，达到了良好的分离效果，为进一步的深入研究奠定了物质基础。现将主要研究结果报告如下： 1、竹茹粗粉在温度50～65℃、压力25～35MPa的条件下，经CO2超临界流体动态循环萃取2～5h，得EZR2002。 2、EZR2002外观为黄色或黄绿色的粉末，熔点在74～79℃之间。经溴化钾压片后的红外光谱图显示在2917、2849、1716、1463、1382和720cm-1处有特征性吸收峰。溶于二氯甲烷后的紫外光谱图显示在412nm处有强吸收，在665nm处有次强吸收，还分别在505、535和605nm附近有弱吸收。经GC-MS联用技术检测，主要成分是木栓酮、羽扇豆烯酮和羽扇豆烯醇等游离三萜化合物。测得不同批次EZR2002中三萜总皂甙元的含量在（55～75）％之间，其中木栓酮的含量为（13.3～15.2）％，羽扇豆烯酮的含量为（1.3～1.5）％。 3、建立了竹茹中主要的五环三萜类化合物——木栓酮的气相色谱测定方法。竹茹粗粉用正己烷热回流提取8 h，得正己烷萃取物。GC条件：FID检测器、HP-5色谱柱（5％phenyl methyl siloxane，30 m×0.25 mm×0.25 μm）、柱温从140℃以20℃／min升温到280℃，保持22 min。结果表明提取方法有效，淡竹茹中木栓酮含量为0.688％；木栓酮检出限为1.01 μg／ml，定量限为4.06 μg／ml，回收率为101.1％，相对标准偏差为2.3％。提取方法简单，检测方法灵敏、重现性好，为竹茹原料的质量控制提供了可量化的参数。 4、EZR2002中主要的三萜类化合物木栓酮、羽扇豆烯酮和羽扇豆烯醇在硅胶薄板上用溶剂展开体系苯：石油醚（4：1，v／v）展开两次，三者能完全分离。碘蒸汽显色后，木栓酮显暗紫色，羽扇豆烯酮和羽扇豆烯醇显黄色。 5、EZR2002 8.3900g经硅胶柱层析分离制备，用正己烷：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，木栓酮、羽扇豆烯酮和羽扇豆烯醇回收率分别为80.3％、72.4％和98.0％。制备得到不同纯度的木栓酮421.90 mg（＞98％）、409.13 mg（＞90％）和155.83浙江大学2004届硕士学位论文姚晓宝竹茹中三裕类化合物的研究mg（>85%）。 6、首次用HSCcC成功分离了竹茹中的三菇化合物。选择正己烷:二氯甲烷:乙睛（10:3.5:6.5，v/v）为HSCCC的溶剂系统，10一25oC分层时间小于75，上下相体积比0.620.60，三菇化合物木栓酮、羽扇豆烯酮和羽扇豆烯醇在溶剂系统中分配系数存在差异。用单台分析型HSCCC仪可分离EZR2002样品0.31599，在300min内可将木栓酮、羽扇豆烯酮和羽扇豆烯醇分离，回收率分别为86.1%、90.3%和97.7%。用制备型HSCCC可分离EZRZoo:样品1.04509，在750 min内可将木栓酮、羽扇豆烯酮和羽扇豆烯醇分离完全，回收率分别为81.2%、85.3%和80.1%。制备得到木栓酮1 12.86mg（纯度>89%）。 7、柱层析制备得到的木栓酮经曰，IR，GC--MS，NMR结构鉴定，同法国EXTRASYNTHESE公司HPLC纯的木栓酮完全一致。 研究表明，CO:超临界流体萃取技术是一种有效的提取竹茹中三菇类化合物的方法。柱层析和高速逆流色谱HSCCC两种不同方法都能成功制备目标化合物木栓酮、羽扇豆烯酮和羽扇豆烯醇。