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Ferlavirus(FDLV)是引起蛇类呼吸道感染的常见重要病原之一，也是广西人工养殖蛇类的常见疾病之一，临床表现典型的肺炎症状。在本研究中，首先从临床病例中鉴定FDLV，其次筛选适合培养FDLV的细胞系，然后进行培养液的改良和Vero细胞的无血清驯化，第四进行Ferlavirus的保存试验，第五设计分段引物进行Ferlavirus的基因测序，最后建立实时荧光定量PCR方法检测Ferlavirus。 首先本研究首先运用RT-PCR方法检测临床送检的肺炎蛇肺脏和肝脏，将检出的Ferlavirus阳性病料于-80℃低温保存，用于病毒的分离培养。 其次进行细胞系的筛选。在不同的细胞内接种同样剂量的10％的阳性病料处理液，培养24h后每隔4h观察细胞的形态，同时用红细胞凝集(HA)试验测定血凝值。 再次进行培养液的改良和Vero细胞的无血清驯化。选用Earle液为基础培养基，逐步降低血清，同时添加水解乳蛋白、谷氨酰胺等添加因子，Vero细胞生长状态良好，数量倍增明显。Ferlavirus接种到无血清培养的Vero细胞中，细胞病变主要表现为产生合胞体，即多核巨细胞，胞浆呈颗粒样变化，胞膜边缘不整齐甚至模糊不清。取培养后的细胞进行HA试验和RT-PCR检测。 第四，进行Ferlavirus的保存试验。Ferlavirus在环境中容易失去活性，为了获取Ferlavirus的保存方法，进行了血球凝集实验、温度敏感试验、有机溶剂敏感试验、酸性溶液敏感试验。 第五，Ferlavirus的基因测序。采用分段设计引物的方式，针对Ferlavirus设计片段为1500-2000bp的测序引物，用降落PCR、梯度PCR等优化策略，优化PCR反应条件。通过建立重组质粒，将得到的基因片段插入质粒中，送检测序，使用DNAman软件将得到的基因片段拼装组合。 最后建立实时荧光定量PCR方法检测Ferlavirus。针对Ferlavirus病毒的保守区L基因设计相应引物，建立Real Time PCR方法，并对Real Time PCR反应条件的优化、绘制出SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线、并对其特异性、重复性进行分析。结果表明:标准曲线的线性度较好，PCR的扩增效率也比较好，而待测样品的Ct值可以从仪器读取;将不同稀释度的标准品Ferlavirus分别进行PCR扩增，用统计学软件分析表明，所建立的Real-time PCR在组间和组内都具有良好的重复性(P＞0.05)，相关系数均大于0.99。 从以上实验得出结论:(1)Ferlavirus能在传代细胞系BHK细胞和Vero细胞生长，不能在Marc-145细胞和PK细胞生长。(2)Ferlavirus在无血清改良培养基的Vero细胞中，传代5次，培养36小时后可观察到明显细胞病变，血凝效价大于或者等于1∶27，即1∶128时，红细胞凝集(HA)试验和RT-PCR检测均为阳性。(3)初始血凝效价HA为1∶28的Ferlavirus病毒培养液在-80℃仅能贮存35天，加入冷冻保护剂且调节pH为中性或弱酸性后可延长贮存期到65天。(4)设计测序引物，测序并拼接后得到Ferlavirus的基因片段6458bp。(5)成功建立了Ferlavirus的荧光定量PCR检测方法，该方法特异性强，重复性好，灵敏度高，最低可检测到10copies/μl。