猪腺病毒的分离与鉴定

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腺病毒载体是继逆转录病毒载体后在基因治疗、基因免疫等方面应用开发得较早且较成熟的一种基因载体。与逆转录病毒载体相比,腺病毒载体能高效地把外源基因转运到各种靶细胞和组织中,其作为真核细胞基因转移载体具有制备简便、宿主范围广、感染性强、包装容量大、病毒繁殖滴度高、安全性好等优点。使用非人类腺病毒作为载体主要是因为它致病性低甚至没有致病性,而且动物腺病毒与人腺病毒具有相似的基因组结构,目前不同的动物腺病毒已被开发作为腺病毒表达载体,如牛腺病毒三型(BAd3)、犬腺病毒二型(CAd2)、黑猩猩腺病毒一型、绵羊腺病毒七型(OAd7)、猪腺病毒三型和五型(PAd3,PAd5)、禽腺病毒1,8,9和10型(FAd1,8,9,10)。在人的血清中不存在动物腺病毒中和抗体,说明动物腺病毒不在人群中流行,而且,预先存在于人和实验动物中的HAd5中和抗体不交叉中和动物腺病毒,此外,动物腺病毒能有效地转导人和非人类细胞,因此,动物腺病毒作为载体用于人和兽医将更为有效。 本研究根据猪腺病毒保守区六邻体基因设计两对简并引物,建立了nested PCR的检测方法,对51份病猪的气管分泌物作检测,结果只有1份是阳性。然而,我们用其中的13份阴性病料接种PK-15细胞,做病毒分离,结果传到第二代时一份为nested PCR阳性,传到第三代时供有10份为nested PCR阳性,病毒分离阳性率为76.9%。其中有四份传到第四代时引
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