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L-苯丙氨酸(L-phenylalanine，Phe)是人和动物的必需氨基酸之一，是目前全球普遍允许使用的甜味剂(Aspartame)的制造原料之一，并且其代谢与人类遗传疾病如苯丙酮尿症，黑尿症和白化病有关，因此Phe代谢研究始终是人们关注的热点。Phe生物合成的路径长，耗能大，产率低，因此生产成本高，价格昂贵，国内所需产品长期依赖进口，所以构建能用于直接发酵L-苯丙氨酸的高产菌株具有重大的实际意义，因此本论文的工作也将围绕获得苯丙氨酸高产菌的目的展开。 aroG基因编码的3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶(AroG)是苯丙氨酸代谢途径中的关键酶，催化限速步骤E4P和PEP反应生成DAHP，受苯丙氨酸反馈抑制。此前本实验室研究人员通过定点突变Escherichia coli(E.coli)K-12 aroG基因的方法获得了可以解除反馈抑制的优势突变株。本论文在此基础上，以E.coli aroG野生型基因，可以解除反馈抑制的突变基因，以及Salmonella typhimnrium(S.typhimnrium)aroG野生型基因为亲本，通过DNAsuffling的方法对AroG进行改组，得到大量的aroG突变基因库。 通过使用苯丙氨酸类似物对氟苯丙氨酸(pFP)的筛选，我们获得了4株能够于10 mg/ml pFP平板生长的突变株(EC2、EC4、EC6和EC8)，而在同样条件下培养的野生型菌株不能生长，因此这4株菌是已初步解除苯丙氨酸的反馈抑制突变株。对这突变株的aroG基因进行测序和序列分析，结果表明突变体Ec2发生了4个碱基突变，Ec6发生了4个碱基突变，Ec4有6个碱基突变，Ec8有7个点突变。对应氨基酸也发生了变化。其中Ec2突变基因的 T430G，T431C，T662C碱基突变为两个点突变aroG亲本改组产生，T222G为新引入的突变。EC6突变基因的 T662C碱基突变与亲本点突变同，T287C，G703A，G989A为新引入的突变。EC4突变基因的C449T，T644G，G645C碱基突变为两个点突变aroG改组产生，A315G，C435T，G853A为新引入的突变。EC8突变基因的T430G，T431C碱基突变与亲本点突变同，T114C，C197T，A212G，A404G，A925G为新引入的突变。本研究通过DNA shuffling技术有效的对aroG基因进行改组，积累并引入有益突变，实现分子的定向进化，解除AroG的苯丙氨酸反馈抑制，为工业上选育苯丙氨酸高产突变株提供了新的思路和方法。