H9N2亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的建立及对哺乳动物致病性的研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:zhang11289
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H9N2亚型禽流感病毒在全世界范围内广泛流行,不仅给养禽业造成了巨大的经济损失,而且对人类健康造成威胁。流感病毒一般都具有严格的宿主特异性,能够在其天然宿主上很好的复制和传播,而在其它种属的宿主体内则受到限制或根本不能复制,然而这一认识被“97香港禽流感感染人事件”所打破,向世人证实了禽流感病毒可以不经过任何的适应就可以直接感染人类。H9N2亚型禽流感病毒属于低致病性禽流感病毒,通常仅引起家禽的轻微症状但不感染哺乳动物。我们对中国大陆所分离的H9N2禽流感病毒进行小鼠感染试验,表明一部分毒株已经具有感染小鼠并引起小鼠发病的能力。我们从中选出两株代表株,CK/SD/6/96和CK/GD/5/97,前者不能感染小鼠,而后者可在小鼠肺脏复制,病毒滴度达5.17Log10EID50/ml,并引起小鼠发病和体重下降。本研究的目的是为确定哪个基因发生了变异使CK/GD/5/97病毒获得了对小鼠的感染能力,利用反向遗传技术,构建两株病毒8个基因片段的感染性克隆,救获了两株病毒的重组亲本毒及一系列的单基因替换病毒,小鼠感染试验结果表明,用CK/GD/5/97的PB2基因替换CK/SD/6/96的PB2基因,救获的重组病毒R-SD/GDPB2,使原来对小鼠无感染性的病毒在小鼠肺脏的病毒滴度变为2.57 Log10EID50/ml;而用CK/SD/6/96的PB2基因替换CK/GD/5/97的PB2基因所救获的单基因替换病毒R-GD/SDPB2,使病毒在小鼠肺脏的滴度由5.17Log10EID50/ml降低至1.39Log10EID50/ml,降低了103.78倍。实验意义:证明PB2基因的差异导致了病毒CK/SD/6/96和CK/GD/5/97对小鼠感染性的差异。
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