阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种复杂神经退行性疾病,也是最常见的老年痴呆症之一,其病理学特征包括β-淀粉样蛋白（Amyloid-βprotein,Aβ）沉积形成的老年斑（Senile plaques,SP）和由过度磷酸化的tau蛋白形成的神经原纤维缠结（Neurofibrillary tangle,NFT）。据推测,AD关键步骤是Aβ形成的寡聚物作用于中枢神经系统的神经元表面,诱导信号转导的改变,导致突触功能障碍和突触损伤。细胞型朊蛋白（Cellular prion protein,PrP^C）是位于细胞膜脂筏中的糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白。大量证据表明,蛋白质错误折叠和聚集是许多神经退行性疾病的机制,如朊病毒病和AD。研究表明PrP^C在AD发病机制中具有重要作用,并且可能成为AD治疗的潜在干预部位。本实验旨在研究野生型和突变型朊蛋白（Prion protein,PrP）对于Aβ纤维化的影响。表达获得野生型人全长PrP、AD相关的突变型PrP和非AD相关的突变型PrP,利用ThT荧光反应检测不同类型的PrP对Aβ纤维化的抑制作用。首先构建突变型PrP表达载体,包括S97N、F198V、P102L、Y145stop表达载体。原核表达野生型人全长PrP WT(PrP_23-231),和上述四种突变型PrP。裂解菌体获得PrP,通过在镍柱上变性复性纯化蛋白,SDS-PAGE检测纯化效果。经过透析和浓缩之后,利用G250检测蛋白浓度。PCR结果表明突变型PrP表达载体构建成功,将质粒转化进入菌体表达大量野生型PrP和突变型PrP,超声波破碎菌体提取蛋白时检测到PrP主要以包涵体存在,纯化后获得纯度90%以上的PrP溶液,浓缩后获得高浓度的PrP水溶液。冷冻干燥WT、S97N、F198V、P102L、Y145stop PrP,获得蛋白粉末。利用六氟异丙醇打散蛋白,获得单体Aβ和PrP。通过ThT荧光检测野生型和突变型PrP自身的聚集,在PrP自身不聚集的浓度下,ThT荧光检测野生型和突变型PrP对抑制Aβ纤维化的影响。实验结果显示,S97N、F198V与WT三组样品中,Aβ荧光强度相近,说明这两个突变位点的效果并不明显;Aβ荧光强度最低的为Y145stop突变组,说明Y145stop突变位点的纤维化抑制效果最好,此位点对于Aβ的纤维化影响最为敏感;Aβ荧光强度最高的为P102L突变组,P102L突变PrP对于Aβ纤维化的抑制效果最低。