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目前在很多物种尤其是动植物中已经发现了多种smallRNA,并对其生成途径和功能机制进行了细致的研究。但对低等真核生物而言,只有粗糙脉孢霉(Neurosporacrassa)和稻瘟病菌(Magnaportheoryzae)等少数物种中验证了smallRNA的存在,并且除了粗糙脉孢霉中的milRNA与miRNA相近以外,在真菌中还没有发现miRNA。本课题对捕食线虫真菌少孢节丛孢(Arthrobotrysoligospora)捕器形成过程中的smallRNA进行研究,利用高通量测序和生物信息学分析,通过定量PCR和Northernblot等实验技术对少孢节丛孢中smallRNA进行初步鉴定。对未诱导菌丝的Northernblot检测发现,少孢节丛孢可能含有smallRNA,并可能包含两种不同的smallRNA类型。但由于没有确定smallRNA大小和生成过程,尚无法判断其类型。此外,本课题通过qde-2-likegene的敲除和dicer-likegene在捕器形成过程的定量PCR检测,初步判断这两个基因参与少孢节丛孢的捕器形成过程并可能发挥重要作用。
论文的创新性:
1.本文首次对捕食线虫真菌进行smallRNA研究,并已得到初步结果。
2.本文对少孢节丛孢可能参与smallRNA生成过程的基因dicer-likegene和qde-2-likegene进行基因敲除、定量PCR等研究,有助于研究RNAi机制在捕食器官形成中的可能的作用,也为后期进行smallRNA生成机制研究奠定基础。