论文部分内容阅读
大蓟为菊科蓟属的多年草本植物,常用来凉血止血,其同时为药食同源品种,嫩叶可以食用,现代药理研究表明大蓟具有很多生物活性。大蓟中有效成分复杂,至今尚未完全明晰,对大蓟的活性成分还有待进一步研究,以促进大蓟资源的利用。本论文通过不同方法分离得到大蓟大类成分,并通过柱层析及波谱技术分离纯化鉴定了大蓟黄酮类化合物。并对其抗氧化、抗炎及抑制巨噬细胞泡沫化作用进行进一步探究。（1）通过不同的方法分离得到大蓟黄酮、皂苷、生物碱、香豆素和挥发油,并对其进行抗氧化、护肝、抗肿瘤和抗炎活性评价。含量测定结果显示黄酮是大蓟的主要成分。在抗氧化活性评价结果显示黄酮的抗氧化性最好,其次为皂苷和香豆素,挥发油和生物碱抗氧化最弱。在细胞毒性试验中,香豆素的细胞毒性最强(IC50=162.7μg/mL),其次为生物碱,而挥发油可以促进细胞增殖。在护肝实验中,大蓟黄酮具有较好的护肝活性。在抗癌实验中,皂苷的抗癌活性最好,且对肺癌A549细胞更为敏感。在脂多糖（LPS）诱导的炎症细胞模型中,挥发油、皂苷和黄酮均显示出较好的抗炎活性,可以抑制LPS诱导的巨噬细胞一氧化氮释放及相关炎症因子的产生。（2）大蓟提取物通过大孔树脂柱层析乙醇-水梯度洗脱得到不同的洗脱部位。活性筛选结果显示,50%乙醇系统部位具有较好的抗炎活和抗氧化活性。因此进一步通过柱色谱等方法对其进行分离纯化得到6个单体化合物;乙酸乙酯对大蓟粗提取物进行萃取得到大蓟总黄酮,并对其进一步分离纯化得到9个单体化合物;通过核磁共振波谱法、质谱、薄层析和高效液相等数据比对及分析鉴定其结构,共得到13个黄酮化合物,其分别为（1）木樨草素-7-O-葡萄糖醛酸、（2）木樨草素-7-O-葡萄糖醛酸甲酯、（3）芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸、（4）蒙花苷、（5）芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸甲酯、（6）柳穿鱼叶苷、（7）山柰酚、（8）槲皮素、（9）紫云英苷、（10）槲皮素-3-O-葡萄糖、（11）山柰酚-3,7-O-二鼠李糖、（12）山柰酚-3-O-芸香糖、（13）芦丁;其中化合物1-3,5,9-12为首次从大蓟中分离得到。（3）细胞活性检测结果显示不同化合物的对肝癌细胞HepG2生长的抑制率不同,紫云英苷和山柰酚-3-O-芸香苷显示了较好的抑制癌细胞生长的活性。抗氧化活性评价显示木樨草素-7-O-葡萄糖醛酸及其甲酯化合物抗氧化活性最好,两个化合物均可以降低细胞内活性氧水平,提高细胞内抗氧化物谷胱甘肽的含量。（4）所分离得到的黄酮类化合物对LPS诱导的巨噬细胞一氧化氮释放显示出不同的抑制作用,其中木樨草素-7-O-葡萄糖醛酸的抑制作用较强,进一步研究表明木樨草素-7-O-葡萄糖醛酸可能是通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路抑制诱导型一氧化氮合酶、环氧化酶-2、肿瘤坏死因子α、白介素-6等相关基因的转录,从而调节炎症因子的分泌,最终发挥抗炎作用。（5）油红O染色及细胞摄取荧光标记氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）实验结果表明单体化合物中芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸可以抑制巨噬细胞摄取ox-LDL及胞内的脂质积累,降低ox-LDL诱导巨噬细胞内低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯的含量。RT-qPCR和western blot结果表明芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸能够抑制ox-LDL诱导上调的清道夫受体CD36 mRNA,促进ox-LDL诱导下调的清道夫受体B1 mRNA的表达并调节蛋白的表达。通过对MAPKs通路的探究,发现芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸可以抑制ox-LDL诱导的细胞外调节蛋白激酶ERK的激活,这可能是其发挥作用的信号通路之一。