土荆芥挥发油成分分析及药用活性研究

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许多植物挥发油都具有抗菌、杀菌和杀虫等活性作用,随着近十多年来人们对绿色环保化学品及农药的广泛关注,植物源化学品,尤其是植物挥发油的研究成为了现代生物及中药学科的热点问题之一。本论文研究了土荆芥挥发油的成分差异及其活性。土荆芥中所含有的挥发油具有抗菌、驱虫、抗癌、祛风除湿、通络止痛等功效。国内外众多学者对其进行了研究,但主要集中于其化学成分、杀虫活性、种子萌发特性等方面。目前研究的主要不足之处有:一、不同学者使用的分离条件及色谱条件各异,缺乏统一的标准,从而导致不同产地土荆芥挥发油成分及其含量的差异较大;二、对土荆芥挥发油的抗菌消炎和抑制农田植物病源菌的研究较少。针对以上不足,本文采用统一的提取分离、分析鉴定条件和方法,建立了土荆芥挥发油的标准指纹图谱,对我国9省12个产区土荆芥的化学成分及含量进行了分析测定,为土荆芥的质量控制提供了基本的科学依据,对于提高中药质量,促进中药现代化具有重要意义。在建立土荆芥挥发油指纹图谱的基础上,还分析了栽培时水肥条件和药材采收期、采收部位、储存时间及挥发油提取时间等因素对土荆芥挥发油的品质的影响,研究了陕西杨凌产土荆芥挥发油对皮肤及器械消毒所要求的15种标准菌株的抗菌作用、对西北地区10种常见植物病原真菌的抑菌作用及对3龄粘虫和淡色库蚊成虫的毒杀活性。以期为充分利用土荆芥植物资源,在天然消毒杀菌产品开发利用、天然医药及农药产品的开发方面提供科学依据。主要结论如下:1.本论文在统一了挥发油提取方法,分析仪器和分析方法的基础上,用我国9省12个产地的12个土荆芥样本,建立了土荆芥挥发油的气相色谱指纹图谱,通过该指纹图谱,标定了17个特征共有峰作为土荆芥挥发油质量鉴别的指标峰,建立该图谱所用的GC色谱分析条件可使土荆芥挥发油中各组分达到较好地分离效果,精密度、重复性、稳定性良好,可以作为土荆芥药材质量评价的一个重要标准和科学依据。2.气质联用分析结果表明我国12个产地的土荆芥挥发油的主要化学成分基本相似,均含有4种主要化学成分:α-松油烯、P-伞花烃、冰片烯和驱蛔素,而不同产地这四种主要成分的含量不同。土荆芥挥发油的主要成分都具有薄荷烷骨架,含量大于1%的成分一般不超过5种,主要成分含量占绝对优势,占挥发油总量的90%以上。3.本论文分析研究了栽培水肥条件,不同采收期、不同采样部位和不同储存时间等因素对土荆芥挥发油的影响,结果表明土荆芥挥发油的品质受这些因素的影响较大。施用Zn、Mn、Fe、Mo、和B等五种微量元素肥料处理土荆芥的出油率均有显著性提高,其中施用Zn肥的处理出油率增幅最大,且挥发油中所含主要化学成分的种类与含量变化不大;不同水分处理中,土壤相对含水量为40%的处理土荆芥出油率最高;土荆芥植株不同部位的出油率差异十分显著,其中种子出油率最高,茎的出油率最低,叶片出油率居中。土荆芥植株的3种部位挥发油的化学成分基本相似,但各物质的含量差异较大。不同生育期土荆芥的出油率变化较大,幼苗期出油率最低,随着土荆芥植株的生长,挥发油在植物体内不断积累,到种子成熟期达到最大值,枯草期出油率大大下降。储存时间对土荆芥挥发油出油率具有一定的影响。其中采收到储存15 d之内,出油率随储存时间的延长而逐渐增大,而储存15 d到30 d之间,出油率随储存时间的延长反而逐渐减小。但总体来看,在储存30 d之内,土荆芥出油率变化不大。总之土荆芥的最佳采收期为种子成熟期;采收最佳部位为带有果穗的地上部分;最佳储存时间为采收后15 d左右;用水蒸气蒸馏法提取挥发油时,蒸馏1 h得到的挥发油质和量达到最优。4.土荆芥挥发油具有广普的抗细菌和抗真菌作用,对临床常见的致病菌有较强的抑制和灭活作用。在供试的皮肤及器械消毒所要求的15株标准菌株中除对绿脓假单胞菌CMCC10211株无抑制作用外,对金黄色葡萄球菌等其它14株标准菌株均有较强的抑制作用。土荆芥的体外抗菌浓度较低,对于不同的菌株,最小抑菌浓度1.95-62.5μL/mL,最小杀菌浓度7.8-250μL/mL。所以土荆芥挥发油具有广普的抗菌效果,是一种利用价值很高的潜在抗菌药源,亟待进一步研究开发。急性毒性试验结果表明:土荆芥挥发油的小鼠灌胃处理中毒剂量较高。小鼠灌胃处理的半数致死剂量LD50是1183μL/kg,推算出土荆芥挥发油对于人的半数致死剂量LD50为9.18 mL/70kg。5.采用生长速率法测定了土荆芥挥发油对4个亚门10种植物病原真菌的抑制效果。结果表明对供试的10种植物病原菌均有一定的抑制效果,其中对小麦纹枯病菌抑制作用最强,0.5 uL/mL浓度下9 d内抑制率均达到100%以上;对番茄早疫病菌、辣椒疫霉病菌有较强的抑制作用,0.5 uL/mL浓度下,7 d内的抑制率分别为88.9%和74.5%,再次为小麦全蚀病菌、黄瓜枯萎病菌和小麦赤霉病菌,同样在0.5 uL/mL浓度下,5 d的抑制率分别为84%、70.6%和53.2%;土荆芥挥发油对番茄灰霉病菌、苹果炭疽病菌和黄瓜炭疽病菌等3种病原菌的抑制作用较差,抑菌率均低于35%。随挥发油浓度增大,抑菌效果增强,同时随培养时间的延长,抑菌能力下降。土荆芥挥发油对植物源真菌具有广普、高效且持久的抑菌活性,具有开发成农药的良好前景。6.土荆芥挥发油对昆虫具有高效、快速的熏蒸杀虫效果。作为熏蒸剂,土荆芥挥发油对鳞翅目害虫粘虫3龄幼虫和双翅目的卫生害虫淡色库蚊成虫的熏蒸有效剂量都小于10 ppm。土荆芥挥发油对粘虫的熏蒸LC50在30 min时,仅为2.11μL/L,75 min时快速下降接近一半,LC50值为1.07μL/L。用LC95剂量处理粘虫,得到挥发油在LC95剂量下对3龄粘虫的致死中时LT50值为20.04 min;触杀活性试验结果表明土荆芥挥发油对粘虫的触杀活性随着处理时间的延长而增强,同时随着挥发油浓度的增加,粘虫的死亡率增大,且致死时间大大缩短;与触杀相比,采用土荆芥挥发油熏蒸防治粘虫,效率更高。土荆芥挥发油对淡色库蚊2 h熏蒸处理的致死中浓LC50=1.5853μL/L。LC95剂量处理所得的击倒中时KT50为8.71 min。具有高效、快速的熏蒸活性。但是只有2 h的趋避时间,驱蚊效率低,刺激皮肤,且对人有较强毒性,不适合作为蚊虫的驱避剂和涂肤液使用。
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